細(xì)胞鑒定指南

時(shí)間：2023/12/20閱讀：885

細(xì)胞污染是細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的情形。細(xì)胞污染通常分為微生物污染和真核生物污染。微生物污染指的是真菌、細(xì)菌、支原體等的污染。微生物污染容易辨識(shí)，可通過(guò)肉眼和利用顯微鏡觀察培養(yǎng)基的顏色變化進(jìn)行判斷。細(xì)菌污染通常使培養(yǎng)基變黃，且顯微鏡下有小黑點(diǎn)，酵母污染的培養(yǎng)基變紫色，顯微鏡下可見(jiàn)透明成串的圓形斑。但支原體污染較難看出，因?yàn)橹гw的生長(zhǎng)較慢，因此很容易被忽略。真核生物污染是由于實(shí)驗(yàn)員操作不當(dāng)發(fā)生的細(xì)胞系之間的交叉污染。為避免細(xì)胞污染造成深遠(yuǎn)的影響，細(xì)胞鑒定萬(wàn)不可少。

細(xì)胞鑒定指南

細(xì)胞系的鑒定主要圍繞四個(gè)方面進(jìn)行：

1、種系來(lái)源：常用技術(shù)包括STR分型，限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性（AFLP），染色體組分析，同工酶分析，人淋巴細(xì)胞抗原（HLA）分型。STR分型是重要的種系來(lái)源判斷手段。STR位點(diǎn)，又被稱(chēng)為微衛(wèi)星，是3-7 bp的短串聯(lián)重復(fù)序列，具有高度多態(tài)性，被稱(chēng)為細(xì)胞的DNA圖譜指紋，因此可以進(jìn)行STR分型，通過(guò)與專(zhuān)業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，判斷樣本所屬細(xì)胞系。

2、組織來(lái)源：常用技術(shù)包括形態(tài)學(xué)手段、免疫組化分析。形態(tài)學(xué)手段是利用不同組織可能具有特殊的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)判斷組織來(lái)源。免疫組化是利用標(biāo)記的抗體定位組織特異性抗原來(lái)確定細(xì)胞的組織來(lái)源。

3、特異性功能檢測(cè)：根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)和功能，采用特異性指標(biāo)鑒定細(xì)胞。比如，腺細(xì)胞產(chǎn)生分泌蛋白或者激素。腫瘤細(xì)胞需要具備腫瘤組織的特性。

4、是否發(fā)生轉(zhuǎn)化和惡變：常用技術(shù)包括核型分析、細(xì)胞生長(zhǎng)行為觀察（是否接觸抑制）、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)等。核型分析包括對(duì)染色體數(shù)目、形態(tài)、組成的研究，常用到染色體染色技術(shù)。核型分析可揭示染色體是否發(fā)生畸變、細(xì)胞功能、進(jìn)化活動(dòng)和分裂關(guān)系。長(zhǎng)期傳代可能會(huì)造成染色體畸變，因此需要定期檢查染色體核型。正常細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中可能會(huì)轉(zhuǎn)化，獲得永生性或者惡型性。因此需要鑒定來(lái)區(qū)分正常細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞。

腫瘤細(xì)胞鑒定

細(xì)胞鑒定指南

對(duì)于腫瘤細(xì)胞，需要鑒定其是否保留腫瘤組織的特性，因此需要進(jìn)行一些鑒定步驟，包括集落形成實(shí)驗(yàn)、成瘤性檢測(cè)和正常組織侵襲實(shí)驗(yàn)等。

a. 細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)：癌細(xì)胞株對(duì)培養(yǎng)條件的適應(yīng)性較強(qiáng)、獨(dú)立生存能力也較強(qiáng)，細(xì)胞集落率更高。因此可以通過(guò)測(cè)定細(xì)胞集落形成率，判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)能力，從而判定是否為無(wú)限細(xì)胞系。

b. 成瘤性檢測(cè)：將腫瘤細(xì)胞注射進(jìn)入裸鼠體內(nèi)，檢測(cè)是否能在裸鼠體內(nèi)形成腫瘤。

c. 正常組織侵襲實(shí)驗(yàn)：該實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)腫瘤細(xì)胞是否對(duì)正常組織具有侵襲和轉(zhuǎn)移的能力。

d. 其他：其他還包括對(duì)于密度依賴(lài)生長(zhǎng)特性改變（接觸抑制）、分子水平特征的鑒定。接觸抑制是判定腫瘤和正常細(xì)胞的重要依據(jù)。

干細(xì)胞鑒定

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干細(xì)胞的重點(diǎn)是檢測(cè)細(xì)胞的多能性。常規(guī)鑒定方法包括核型分析、擬胚體（EB）形成分析、三胚層分化檢測(cè)、堿性磷酸酶染色、多能性標(biāo)志物檢測(cè)和畸胎瘤檢測(cè)等。

a. EB分化檢測(cè)：EBs是人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的三維聚集物，即是干細(xì)胞多能性的標(biāo)志。EB分化檢測(cè)的流程是：將EB接種于含血清的培養(yǎng)基中自發(fā)分化，然后利用流式檢測(cè)三胚層表面標(biāo)志物，判定多能性。

b. 三胚層分化檢測(cè)：分別將胚胎干細(xì)胞或者誘導(dǎo)多能干細(xì)胞向三胚層分化培養(yǎng)，分別檢測(cè)特定胚層的標(biāo)志物，從而判斷其多能性。

c. 堿性磷酸酶（Ap）染色：未分化的干細(xì)胞會(huì)高水平表達(dá)Ap。通過(guò)對(duì)固定的干細(xì)胞染色，分化的細(xì)胞無(wú)色，未分化的細(xì)胞呈現(xiàn)紫色或者紅色。Ap染色是一種低成本、簡(jiǎn)單快速的方法。

d. 多能性標(biāo)志物檢測(cè)：未分化狀態(tài)的ES和iPS能表達(dá)特定的表面標(biāo)志物，包括TRA-1-81、TRA-1-60、SSEA-3、SSEA-4、Nanog、SOX2、Oct4等。

e. 畸胎瘤檢測(cè)：將一定數(shù)量的干細(xì)胞注射進(jìn)入免疫缺陷小鼠體內(nèi)， 4-12周后，多能干細(xì)胞能生成畸胎瘤?；チ霭巳齻€(gè)胚層的組織，可通過(guò)組織學(xué)手段檢測(cè)。但是該方法耗時(shí)費(fèi)力，費(fèi)用大。

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