前一階段花費了不少時間，來摸索體外BBB的構(gòu)建方法，試了三種Transwell板，試用了2-3臺細胞電阻儀，也換了不同課題組的細胞，功夫不負有心人，終于構(gòu)建成功拿到了理想結(jié)果。 當初在摸索階段從小紅書上也獲得很多靈感，也感激給予幫助不吝賜教的朋友們，因此借總結(jié)一些經(jīng)驗，分享出來，希望友友們少走彎路。
1、細胞狀態(tài)很重要！一定要等到細胞狀態(tài)良好時再種板，上室小孔膜上鋪5W個細胞，種板要均勻，上室100-200μL完培，下室600-800μL完培。
2、不要污染！由于種Transwell板比較復(fù)雜，工序多，要時刻注意消毒。種完板后，不用一直鏡下觀察；使用電阻儀檢測室，更要注意不要污染。
3、 選擇合適的Transwell板，確定自己需要多少孔的孔板，從而知道種多少個細胞。如果需要鏡下觀察細胞狀態(tài)的話，要用PET膜（透明的）。我當初試了甄選/康寧/潔特的，最后選了潔特的孔板。
4、選擇穩(wěn)定好用的細胞電阻儀！??！這個是重中之重，比如密理博的電阻儀，是筷子電極，手持式的話容易抖，導(dǎo)致數(shù)值不穩(wěn)。我選的是北京金工的RE1600上皮電壓電阻儀，可以平穩(wěn)放在孔板上，檢測的時候數(shù)值超級穩(wěn)定。
5、關(guān)于BBB形成時間，每次構(gòu)建BBB的時長都要根據(jù)細胞狀態(tài)而異，要確保單層細胞形成（細胞電阻達到穩(wěn)定平臺期），再進行下一步實驗。
文章引用出處：體外血腦屏障模型構(gòu)建-大功已成 - 小紅書 (xiaohongshu.com)
19