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酵母菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)-杜氏管發(fā)酵法
閱讀：711 發(fā)布時(shí)間：2024-8-22一、原理介紹
酵母菌屬真核生物，與細(xì)菌相比，酵母菌具有更完整的呼吸系統(tǒng)，可將糖類（包括糖、醇、苷、甙等）全部氧化分解為二氧化碳和水，而細(xì)菌通常只能將糖類分解為低分子的有機(jī)酸等產(chǎn)物。因此，細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)常用酸堿指示劑通過(guò)顏色的變化檢測(cè)某種糖是否能夠被細(xì)菌分解利用，而酵母菌則可以通過(guò)杜氏管觀察是否產(chǎn)氣，來(lái)判斷酵母菌是否能分解利用某種糖。
二、培養(yǎng)基的配制及接種
（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基（0.5%酵母液）：稱取0.5g酵母浸粉，加熱溶解于100mL純化水中，分裝至含導(dǎo)管的試管中，每支7.2mL（分裝量依試管尺寸而定，120mm試管可分裝3.6mL），115℃滅菌30min或121℃滅菌15min；
（2）糖溶液：?jiǎn)翁牵ㄈ缙咸烟?、半乳糖等）或雙糖（如蔗糖、乳糖等）用純化水配制成20%溶液，三糖（如棉子糖）用純化水配制成40%溶液，用0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾除菌，備用。
（3）將過(guò)濾除菌的糖溶液0.8mL加入至滅菌后的含7.2mL基礎(chǔ)液的試管中（糖溶液：基礎(chǔ)液=1:9即可），混合均勻，并排掉導(dǎo)管內(nèi)氣體；
（4）挑取活化好的待測(cè)菌株至生理鹽水中制成約106-108CFU/mL的菌懸液，吸取0.1mL菌懸液加入至糖發(fā)酵試管中，或用接種環(huán)（針）挑取菌苔直接接種至糖發(fā)酵試管中，25℃培養(yǎng)14天，逐日觀察倒管內(nèi)是否有氣體產(chǎn)生。
三、試驗(yàn)現(xiàn)象及解釋
a、b分別為白色念珠菌和釀酒酵母菌的葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)，倒管內(nèi)充滿氣體，即為葡萄糖發(fā)酵陽(yáng)性反應(yīng)；c、d分別為白色念珠菌和酵母菌的乳糖發(fā)酵試驗(yàn)，倒管內(nèi)無(wú)氣體產(chǎn)生，即為乳糖發(fā)酵陰性反應(yīng)。
注：強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)通常會(huì)在數(shù)天內(nèi)觀察到氣體迅速充滿倒管；遲緩陽(yáng)性反應(yīng)通常要培養(yǎng)7-14天可觀察到氣體充滿倒管；若培養(yǎng)14天后倒管內(nèi)僅有少量氣體，則為弱陽(yáng)性反應(yīng)；14天后若導(dǎo)管內(nèi)無(wú)氣體，則為陰性反應(yīng)。
注:本文屬海博生物原創(chuàng),未經(jīng)允許不得轉(zhuǎn)載。