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茁彩生物?走進(jìn)EdU系列熒光染色
閱讀：732 發(fā)布時(shí)間：2023-5-23細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞毒性、DNA復(fù)制及修復(fù)、信號(hào)通路等是測(cè)定DNA合成情況研究方向的常用方法之一，用到的檢測(cè)試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物（BrdU 、EdU ），兩種試劑在檢測(cè)方面有一些不同之處。
BrdU免疫檢測(cè)需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，
EdU因?yàn)槠淙擦u基團(tuán)可以與一些熒光染料發(fā)生“Click"化學(xué)反應(yīng)，無需變形，從而將細(xì)胞標(biāo)記上熒光，因此應(yīng)用更廣泛。
EdU和Brdu檢測(cè)區(qū)別
Brdu 檢測(cè)增殖細(xì)胞的特點(diǎn)及原理
Brdu(5-bromodeoxyuridine)是一種假核苷酸，它被用來檢測(cè)細(xì)胞增殖。它可以通過與正常DNA堿基結(jié)合，從而替換掉正常DNA。Brdu在細(xì)胞分裂時(shí)被復(fù)制到DNA中，并在細(xì)胞內(nèi)存在一段時(shí)間，因此它可以用來指示哪些細(xì)胞正在增殖。
Brdu檢測(cè)的基本原理是：在細(xì)胞增殖過程中，Brdu會(huì)被復(fù)制到DNA中，并與DNA堿基結(jié)合。這些DNA含有Brdu的細(xì)胞可以通過免疫組化或FISH技術(shù)被檢測(cè)出來。
Brdu的檢測(cè)可以用于研究細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂，也可以用于檢測(cè)癌癥細(xì)胞的增殖和活動(dòng)。例如，Brdu可以用來檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中的DNA損傷，以及化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用。
Brdu也可以用于檢測(cè)免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞，例如檢測(cè)T細(xì)胞增殖以及抗原激活的活性T細(xì)胞。此外，Brdu也可以用來檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育。
Brdu檢測(cè)是一種有效的檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法，它可以用來研究細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂和發(fā)育，以及腫瘤細(xì)胞的活動(dòng)和化療藥物的作用。
EdU 檢測(cè)增殖細(xì)胞的特點(diǎn)及原理
EdU（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，５‐乙炔基‐２′脫氧尿嘧啶核苷）也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與５位C原子相連的甲基被乙炔基取代，在S期細(xì)胞增殖時(shí)可作為底物摻入到正在復(fù)制的DNA鏈中，
EdU在細(xì)胞增殖時(shí)能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中，基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以有效地檢測(cè)處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。熒光染料可以同EdU發(fā)生“Click"化學(xué)反應(yīng)（點(diǎn)擊法），從而將增殖的細(xì)胞標(biāo)記上熒光?？捎糜诩?xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測(cè)、線粒體活性檢測(cè)以及病毒增殖活性檢測(cè)等，EdU亦適用于活體注射，穩(wěn)定，對(duì)活體沒有副作用。
與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法相比，EdU檢測(cè)法更簡(jiǎn)單、更快速、更準(zhǔn)確，不需要嚴(yán)格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測(cè)細(xì)胞增殖的真實(shí)情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測(cè)速度。
EdU和Brdu檢測(cè)區(qū)別見下表
Edu | Brdu | |
|---|---|---|
分子量大小 | 252.22 g·mol?1 | 307.098 g·mol?1 |
標(biāo)記檢測(cè)方式 | 化學(xué)反應(yīng)（點(diǎn)擊法） | 免疫反應(yīng) |
是否影響其他標(biāo)記 | 不影響 | 影響 |
DNA是否變性 | 否 | 是 |
標(biāo)記檢測(cè)時(shí)長(zhǎng) | ≤2.5 h | 過夜 |
檢測(cè)靈敏度 | 高 | 一般 |
EdU檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)：
1、更簡(jiǎn)單：僅需EdU孵育；無需抗原抗體反應(yīng)，基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單高效，反應(yīng)僅需要幾分鐘；
2、更靈敏：無需抗體，檢測(cè)染料僅BrdU抗體的1/500,很容易擴(kuò)散，即便是單個(gè)增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測(cè)；
3、更快速：無需過夜，省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟，只需2.5 h；
4、更準(zhǔn)確：無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完整；
5、更兼容：允許與多種抗體、熒光染料同時(shí)標(biāo)記；對(duì)樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時(shí)標(biāo)記，能夠同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞其他性狀特征；
6、應(yīng)用性廣，細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測(cè)、病毒增殖活性檢測(cè)，適用于各種動(dòng)物細(xì)胞檢測(cè)，對(duì)植物細(xì)胞亦適用。