如何準(zhǔn)備條件培養(yǎng)基樣品
我們建議準(zhǔn)備無血清或低血清培養(yǎng)基樣品，因?yàn)檠逋锌赡墚a(chǎn)生顯著背景信號(hào)的細(xì)胞因子。如果需要測(cè)試含有血清的培養(yǎng)基，我們建議還運(yùn)行未培養(yǎng)的培養(yǎng)基空白來評(píng)估基線信號(hào)。然后可以從培養(yǎng)基樣本數(shù)據(jù)中減去該基線。
第 0 天，在含有完quan培養(yǎng)基的 100 mm 組織培養(yǎng)板中接種約 100 萬個(gè)細(xì)胞。*
第3天，除去培養(yǎng)基并用6-8ml無血清或低血清培養(yǎng)基（例如含有0.2%小牛血清的培養(yǎng)基）替換培養(yǎng)基。
第 5 天，將培養(yǎng)基收集到 15 ml 管中。在 4℃ 的離心機(jī)中以 2,000 rpm 的速度離心 10 分鐘。保存上清液。將上清液轉(zhuǎn)移至 1.5 ml Eppendorf 管中。將上清液儲(chǔ)存在-80°C 直至實(shí)驗(yàn)。大多數(shù)樣品可以通過這種方式保存至少一年。
*最佳接種細(xì)胞數(shù)量因細(xì)胞類型而異，可能需要憑經(jīng)驗(yàn)確定。
注意：如果需要進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，強(qiáng)烈建議在制備后對(duì)所有樣品進(jìn)行分裝，大程度地減少多次凍融循環(huán)導(dǎo)致的細(xì)胞因子降解。
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