Bst DNA 聚合酶（大片段）
用于 DNA 測(cè)序高 GC 區(qū)域以及納克量 DNA 模板的快速測(cè)序。
描述：
Bst DNA 聚合酶，大片段是嗜熱脂肪芽孢桿菌 DNA 聚合酶蛋白的一部分，包含 5′ → 3′ 聚合酶活性，但缺乏 5′ →3′ 核酸外切酶活性。
酶提供強(qiáng)大的鏈置換活性。最佳溫度為 60-65 ?C。Bst 在 80 ?C 時(shí)熱失活。Bst 聚合酶大片段由含有嗜熱脂肪芽孢桿菌 DNA 聚合酶基因的大腸桿菌菌株制備，缺乏 5′ → 3′ 核酸外切酶結(jié)構(gòu)域。
Bst DNA 聚合酶大片段提供三種濃度：8,000 U/ml、50,000 U/ml 和 400U/ml，保存緩沖液為 10 mM Tris-HCl，pH 7.5、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA 、0.1% Triton X-100 和 50% 甘油。高濃度 (400U/ml) 還提供無甘油緩沖液和凍干粉末。
圖：MCLAB Bst DNA 聚合酶（大片段）顯示出比其他兩個(gè)供應(yīng)商的產(chǎn)品更高的鏈置換聚合酶活性。
應(yīng)用：
- 核酸擴(kuò)增方法，包括等溫?cái)U(kuò)增、LAMP
- 全基因組擴(kuò)增 -
通過有問題的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)序
使用 Bst DNA 聚合酶的典型 LAMP 方案
成分 | 最終濃度 | 25 µl 反應(yīng) |
Bst 的 10X 緩沖器 | 1X（不含MgSO4） | 2.5 微升 |
硫酸鎂 (100 mM) | 總計(jì) 8 mM | 2.0 微升 |
dNTP 混合物 (10 mM) | 每個(gè) 1.4 mM | 3.5 微升 |
FIP/BIP 底漆 (10X) | 1.6微米 | 1微升 |
F3/B3 底漆 (10X) | 0.2微米 | 1微升 |
LoopF/B 引物 (10X) | 0.8微米 | 1微升 |
Bst 大片段 (8,000 U/ml) | 80-320 U/毫升 | 0.95-1.1 微升 |
DNA樣本 | > 10份或以上 | 不適用 |
無核酸酶水 | 最多 25 µl | |
總反應(yīng)體積 | 25微升 |
比活度： 120,000 U/mg
提供于：
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1.0 mM DTT
0.1 mM EDTA
0.1% Triton X-100
50% 甘油
pH 7.5 @ 25°C
提供于：
10X PCR 緩沖液 II
10x PCR 緩沖液 II ：
200 mM Tris-HCl
100 mM 硫酸銨
100 mM KCl
20 mM MgSO 4
1.0% Triton X-100
pH 8.8 @ 25°C
單位定義：
1 單位定義為將 10 nmol dNTP 轉(zhuǎn)化為酸所需的聚合酶量65°C 30 分鐘內(nèi)不溶物質(zhì)。
推薦儲(chǔ)存條件： -20°C
注意：
- 建議長(zhǎng)期儲(chǔ)存：0.1% Triton X-100
- 不建議反應(yīng)溫度高于 70°C。
- Bst DNA 聚合酶不能用于熱循環(huán)測(cè)序。
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