超氧陰離子自由基清除能力測(cè)試試劑盒

（A002- 192T 酶標(biāo)板法）

一、 測(cè)定原理

該方法利用NADH-PMS-NBT為超氧陰離子(O₂^·-)生成系統(tǒng)，超氧陰離子清除劑能減少NBT的藍(lán)色。通過(guò)檢測(cè)560nm處吸光值可判斷體系中還原物質(zhì)的還原能力。

二、 試劑組成

試劑一：液體50mL×1瓶；

試劑二：液體100μL一瓶；

試劑三：粉劑一支；

試劑四：粉劑一支；

試劑五：1mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，100μL。

三、 儲(chǔ)存條件及有效期

試劑盒-20℃可保存3個(gè)月。

四、 試劑的配制

試劑二工作液：加入10mL試劑一，充分搖勻，現(xiàn)配現(xiàn)用，注意避光；

試劑三工作液：加入10mL試劑一，充分搖勻，現(xiàn)配現(xiàn)用，配好后冰上保存，2h內(nèi)使用；

試劑四工作液：用50mL雙蒸水溶解，搖勻后，取1mL，加入9mL試劑一，現(xiàn)配現(xiàn)用，注意避光，配好的試劑請(qǐng)于2小時(shí)內(nèi)用完。

試劑五：陽(yáng)性對(duì)照，按需使用，-20℃保存。

五、 操作步驟

充分混勻

充分混勻，室溫避光靜置5min使之充分反應(yīng)。560nm處采用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值。

¹空白管很重要，建議做3個(gè)以上平行；

²如樣品顏色較淺可不做對(duì)照管

六、計(jì)算公式

注： 1 如未做對(duì)照孔，可以將其視作為0；

2 陽(yáng)性對(duì)照求值時(shí)將其視作測(cè)定孔進(jìn)行計(jì)算即可。

七、注意事項(xiàng)

1. 如樣品中色素物質(zhì)不是分析對(duì)象，建議先通過(guò)SEP C18柱進(jìn)行脫色處理，處理后樣品可不做對(duì)照孔；

2. 如不確定樣品的超氧陰離子自由基清除能力，可先做不同濃度的稀釋液進(jìn)行摸索，并選擇適宜濃度進(jìn)行測(cè)定，高濃度下，濃度與清除率間并不線(xiàn)性相關(guān)。

3. 試劑二、三切記全程低溫操作，尤其試劑三，長(zhǎng)時(shí)間室溫放置或反復(fù)凍融會(huì)使其失效。試劑四切記避光保存，特別是配制后，需用鋁箔紙包裹，且應(yīng)盡快用完。建議在做好一切其它準(zhǔn)備工作后再配制試劑四應(yīng)用液。試劑四正常顏色為黃色，強(qiáng)光照射下，5-10分鐘內(nèi)會(huì)變?yōu)榫G色，隨后變?yōu)樗{(lán)色，變色后試劑不可再用！

4. 試劑二、三應(yīng)用液和樣品混勻后再加入試劑四，次序顛倒會(huì)導(dǎo)致不顯色。

5. 部分物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致顯色加深，導(dǎo)致求得的抑制率是負(fù)值，如遇到此類(lèi)現(xiàn)象請(qǐng)先確定該物質(zhì)是否具有超氧陰離子清除能力，再考慮更換方法，如鄰苯三酚自氧化法等進(jìn)行測(cè)試。