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雞傳染性法氏囊病測(cè)試劑盒

1 抗原預(yù)包被板條 1塊 7 底物B液 6ml

2 酶結(jié)合物 12ml 8 終止液 6ml

3 濃縮的抗VP2單抗 110ul 9 陰性對(duì)照 50μl

4 單抗稀釋液 12ml 10 陽性對(duì)照 50μl

5 10倍濃縮洗滌液 50ml 11 封板膜 2張

6 底物A液 6ml 12 說明書 1份

?雞傳染性法氏囊病毒檢測(cè)試劑盒檢測(cè)雞血清中的雞傳染性法氏囊病病毒中和抗體，用于評(píng)估養(yǎng)雞場(chǎng)雞傳染性法氏囊病疫苗免疫產(chǎn)生的中和抗體的狀況及感染雞的血清學(xué)輔助診斷。

需自備的設(shè)備及試劑

微量移液器： 0.5μl～10μl、10μl～100μl、100μl～1000μl。 一次性移液器吸頭。 量筒：500ml。 96孔板酶標(biāo)儀。 蒸餾水或去離子水。 洗瓶或洗板機(jī)。

樣品制備

取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

抗VP2單抗工作液的準(zhǔn)備（現(xiàn)配現(xiàn)用）

先計(jì)算好單抗工作液的用量，再將101倍濃縮的抗VP2單抗按1：101的體積比用單抗稀釋液稀釋（例如：900μl單抗稀釋液中加9μl濃縮的抗VP2單抗，可以滿足10個(gè)微孔的用量；每次稀釋時(shí)應(yīng)多稀釋100μl，以避免加樣時(shí)的損耗而造成液體量不足）。

注意事項(xiàng)

試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2～8℃。 不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。 底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。 TMB（底物B液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。 檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2～8℃)。 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得*的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須準(zhǔn)確。

操作步驟

取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品*，可拆開分次使用），加入待檢血清10μl到檢測(cè)板孔底，同時(shí)設(shè)陰性、陽性及空白對(duì)照各1孔，取陰性及陽性對(duì)照各10μl分別加入反應(yīng)孔中，立即加入90μl單抗工作液，空白對(duì)照僅加入100μl單抗稀釋液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。 蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗3次。每次用洗滌液注滿板孔（約350μl），靜置1分鐘后甩掉。洗滌3次后在干凈吸水紙上拍干。 每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌3次, 方法同2。切記*在干凈吸水紙上拍干。 每孔先加底物A液50μl、再加底物B液50μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

結(jié)果判定

以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度A值。試驗(yàn)成立的條件是陽性對(duì)照孔A450值小于或等于0.8，陰性對(duì)照孔A450值必須大于1.2。如果試驗(yàn)無效，試驗(yàn)中的操作值得懷疑，試驗(yàn)應(yīng)重做，并仔細(xì)檢察各組分。

VP2抗體的陽性、陰性通過計(jì)算樣品與陰性對(duì)照的比值（S/N）進(jìn)行判定：

如果S/N值小于0.8，樣品判定為陽性。

        2.如果S/N值大于或等于0.8，樣品判定為陰性。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個(gè)月。

法氏囊位于泄殖腔的背側(cè)，也稱腔上囊，是禽類*的免疫器官，在70-80日齡時(shí)體積*，以后逐漸消退，性成熟時(shí)消失。該病引起雛雞免疫抑制，故對(duì)馬立克氏病和新城疫疫苗接種的反應(yīng)能力下降，也使病雞對(duì)球蟲、大腸桿菌、腺病毒和沙門氏桿菌更易感，造成養(yǎng)雞業(yè)的巨大損失。