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在實(shí)驗(yàn)室中，某些對(duì)于動(dòng)物的研究課題試驗(yàn)，往往需要先將動(dòng)物組織進(jìn)行研磨前處理，而手動(dòng)研磨不容易達(dá)到預(yù)期的研磨效果，不能獲取到合格的檢測(cè)樣品。實(shí)驗(yàn)室研磨動(dòng)物組織，我們可以借助專用的動(dòng)植物組織研磨儀器，簡(jiǎn)便且有效，下面天津東方天凈就來詳細(xì)介紹下動(dòng)物組織研磨方法步驟及注意事項(xiàng)。

動(dòng)物組織研磨前處理步驟

一、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備

1、在實(shí)驗(yàn)操作前，先將PBS緩沖液(磷酸緩沖鹽溶液，phosphate buffer saline)進(jìn)行4℃預(yù)冷，然后準(zhǔn)備若干冰塊備用。

2、使用75%濃度的乙醇溶液對(duì)鑷子、剪刀進(jìn)行消毒處理，如果還需對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行RNA提取，還要使用酒精燈對(duì)鑷子和剪刀進(jìn)行再次消毒，以盡可能消除RNA酶。

3、所有實(shí)驗(yàn)耗材都應(yīng)進(jìn)行高溫高壓滅菌，以保證各種酶不會(huì)對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。

4、將2ml離心管置于冰塊上，并加入適量的PBS緩沖液，一般情況下，實(shí)驗(yàn)所需的組織勻漿的質(zhì)量體積比為10%(即0.1g組織樣本加入1ml液體)。

5、將需要進(jìn)行研磨的組織樣本從零下80℃的冰箱內(nèi)取出，置于冰上，使用滅菌后的鑷子和剪刀，將樣本切成小塊(每塊重量不宜超過0.02g，總重量不宜超過0.2g)，然后放入加好相應(yīng)液體的離心管中，備用。

6、取出已經(jīng)滅菌的氧化鋯研磨球，按照每個(gè)離心管一顆的數(shù)量，將鋯球放入離心管中。此過程需使用鑷子進(jìn)行該操作，并且盡量避免液體飛濺而導(dǎo)致樣本污染。

二、組織研磨

1、將放入樣品和鋯球的離心管標(biāo)記好編號(hào)，然后放入專用的研磨適配器中，蓋好蓋子，將適配器固定在研磨機(jī)上。

2、設(shè)置振動(dòng)頻率為1000次/分鐘，振動(dòng)時(shí)間為5分鐘。

3、由于振動(dòng)過程中的撞擊和摩擦，會(huì)產(chǎn)生大量熱量，使得離心管溫度升高，所以可以選擇具有低溫控制功能的設(shè)備，或者將適配器放入液氮罐進(jìn)行預(yù)冷凍，并減少研磨時(shí)間，避免高溫對(duì)樣本的破壞。

三、組織上清的吸取及保存

1、將研磨完成后的離心管放入低溫環(huán)境下的高速離心機(jī)內(nèi)，以4000rpm的速度離心30分鐘。

2、將所得的上清液用移液器取出，轉(zhuǎn)入至新的離心管內(nèi)，并于零下80℃的環(huán)境長(zhǎng)期保存。

動(dòng)物組織研磨前處理注意事項(xiàng)

1、需要研磨的樣本一定要在冰上操作，保證低溫環(huán)境，這樣可以降低樣本中蛋白質(zhì)(或RNA)的降解速度。

2、所有實(shí)驗(yàn)操作均需佩戴醫(yī)用口罩、手套，并且穿戴好實(shí)驗(yàn)服。

3、在進(jìn)行離心操作前，需要提前開啟離心機(jī)，讓離心機(jī)預(yù)冷，保持4℃左右的低溫環(huán)境。

4、研磨使用的氧化鋯研磨球一定不能多放，數(shù)量過多會(huì)導(dǎo)致管壁破裂，從而造成樣本丟失或污染。

5、使用移液器吸取上清液時(shí)，不要吸取到沉淀。

附：實(shí)驗(yàn)所需儀器、工具及試劑

儀器：TJS三維振動(dòng)球磨機(jī)、低溫高速離心機(jī)

工具：氧化鋯研磨球、移液器、手術(shù)用剪刀、2ml離心管、鑷子

試劑：PBS緩沖液、RIPA裂解液、75%濃度乙醇溶液、Trizol試劑