Rosetta-gami 2(DE3)
Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell

產(chǎn)品編碼：                       保存條件： -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

Rosetta-gami 2(DE3)感受態(tài)細胞基因型：
D(ara-leu)7697 DlacX74 DphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F’[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)

Rosetta-gami 2(DE3)感受態(tài)細胞簡要說明：
Rosetta-gami 2(DE3) 菌株集合了Rosetta 2 和 Origami 2 兩種菌株的優(yōu)點： ＊ pRARE2賦予其Rosetta2菌株的優(yōu)點——補充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對應(yīng)的tRNA，提高外源基因的表達水平。 --
＊ gor522::Tn10 trxB賦予其Origami2菌株的優(yōu)點——突變的硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它們是還原途徑的兩個關(guān)鍵酶，其突變有利于高效形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強蛋白的可溶性；同時該菌株不具有卡那霉素抗性，可用于具有卡那霉素抗性質(zhì)粒的蛋白表達。-- 
＊ 該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)適合T7啟動子誘導(dǎo)的蛋白表達。 ＊ --Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有氯霉素，鏈霉素，四環(huán)素抗性，由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達108 cfu/μg DNA。


Rosetta-gami 2(DE3)感受態(tài)細胞操作說明：

1. Rosetta-gami 2(DE3)菌株感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。--
2. 2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。--
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。--
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。--