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摘要：Agilent Bond Elut QuEChERS 增 強(qiáng) 型 脂 質(zhì) 去 除 產(chǎn) 品 (Agilent Bond Elut QuEChERS EMR-Lipid) 是新一代樣品前處理產(chǎn)品，適用于便捷的分散固相萃取 (dSPE)。這種材料對(duì) 于共萃取基質(zhì)具有較高選擇性，尤其適用于脂肪樣品（脂肪含量 > 5%），而不會(huì)對(duì)分析 物回收率產(chǎn)生不利影響。本研究介紹應(yīng)用這款新型產(chǎn)品對(duì)牛肝中的 30 種代表性獸藥進(jìn) 行的分析。分析流程包括利用酸化乙腈實(shí)現(xiàn)快速高效的蛋白質(zhì)沉淀萃取，然后使用 EMR-Lipid 增強(qiáng)型脂質(zhì)去除凈化管和 EMR-Lipid Polish 反萃管進(jìn)行進(jìn)一步凈化。研究中 通過(guò)共萃取物重量與柱后注射實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定由 EMR-Lipid 方案去除的基質(zhì)量。與其他基質(zhì) 凈化產(chǎn)品相比，EMR-Lipid 增強(qiáng)型脂質(zhì)去除凈化管能夠提供更有效的基質(zhì)去除和更出色 的分析物回收率。EMR-Lipid 優(yōu)化方法能夠?yàn)楦鞣N濃度下的全部 30 種獸藥提供潔凈度以及優(yōu)異的準(zhǔn)確度和精密度，實(shí)現(xiàn)快速、穩(wěn)定而有效的高脂肪含量樣品分析。

前言 獸藥廣泛用于食品生產(chǎn)行業(yè)的動(dòng)物中，以預(yù)防動(dòng)物疾病或作為生 長(zhǎng)促進(jìn)劑。這些藥物將在動(dòng)物組織中發(fā)生富集，使用不當(dāng)更是會(huì) 導(dǎo)致藥物殘留在食用組織中不斷積累，對(duì)人類健康構(gòu)成威脅。隨 著人們對(duì)食品安全的日益關(guān)注，幾乎每個(gè)國(guó)家都出臺(tái)了限制食品 動(dòng)物產(chǎn)品中所使用藥物的法規(guī) [1-4]。 肌肉、肝臟和雞蛋等動(dòng)物源食品通常具有復(fù)雜的化學(xué)成分，因此， 采用包括常規(guī)萃取和高效凈化的高效樣品前處理方法至關(guān)重要。 已有的樣品前處理方法包括傳統(tǒng)的溶劑萃取、固相萃取 (SPE) 或 多項(xiàng)技術(shù)的組合。這些方法通常費(fèi)力費(fèi)時(shí)，僅適用于有限的化合 物類別，并且需要額外進(jìn)行方法開(kāi)發(fā)。 多類別、多殘留方法在監(jiān)管性監(jiān)測(cè)項(xiàng)目中越來(lái)越受青睞，因?yàn)樗?們可以擴(kuò)大分析范圍并提高實(shí)驗(yàn)室效率。過(guò)去幾年來(lái)接受監(jiān)測(cè)的 獸藥數(shù)量越來(lái)越多，如今已報(bào)道了 100 多種獸藥 [5-8]。樣品前處 理通常包括采用乙腈:水混合物進(jìn)行萃取，然后利用 C18 和/或其 他凈化技術(shù)進(jìn)行凈化。C18 等吸附劑去除共萃脂質(zhì)的能力有限，可 能在稀釋或復(fù)溶過(guò)程中產(chǎn)生沉淀。沉淀生成后需要在 LC/MS/MS進(jìn)樣之前對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾，這可能造成分析物損失?？梢栽诜稚?固相萃取 (dSPE) 過(guò)程中加入己烷來(lái)去除共萃取液中的脂質(zhì)，但這 種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力且無(wú)選擇性，并且會(huì)去除疏水性分析物。與 C18 相比，使用氧化鋯吸附劑進(jìn)行凈化能夠改善基質(zhì)凈化效果，但也 會(huì)導(dǎo)致更多的分析物損失，對(duì)于氟喹諾酮、四環(huán)素和大環(huán)內(nèi)酯等 含羧酸和羥基的化合物而言尤其如此 [7,8]。

Agilent Bond Elut QuEChERS EMR-Lipid 增強(qiáng)型脂質(zhì)去除產(chǎn)品是 一種新型吸附劑材料，能夠選擇性去除樣品中的主要脂類而不會(huì) 使分析物損失。去除復(fù)雜基質(zhì)中的脂質(zhì)干擾物對(duì)于 QuEChERS 和 蛋白質(zhì)沉淀等技術(shù)而言尤其重要。由于這些簡(jiǎn)單的樣品前處理方 法無(wú)法充分去除脂質(zhì)，因此脂質(zhì)共萃取物將與目標(biāo)分析物一起保 留到最終樣品萃取物中。這會(huì)導(dǎo)致色譜峰異常、數(shù)據(jù)精密度和準(zhǔn) 確度下降以及維護(hù)問(wèn)題增加。在本研究中，我們考察了一種用于 分析牛肝中 30 種棘手的代表性獸藥的新型樣品前處理方法，該方 法采用簡(jiǎn)單的蛋白質(zhì)沉淀萃取后用 EMR-Lipid 進(jìn)行凈化。所選的 獸藥代表了 17 種不同的類別，包括親水性、疏水性、酸性、中性 和堿性藥物。表 1 顯示這些獸藥的化學(xué)和法規(guī)信息。

實(shí)驗(yàn)部分： 所 有 試 劑 和 溶 劑 均 為 HPLC 或 分 析 純 級(jí) 。 乙 腈 (ACN) 購(gòu) 自 Honeywell（美國(guó)密歇根州馬斯基根）。二甲基亞砜 (DMSO)、獸 藥標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)購(gòu)自西格瑪奧德里奇公司（美國(guó)密蘇里州圣路易 斯）。試劑級(jí)甲酸 (FA) 購(gòu)自安捷倫公司（部件號(hào) G2453-86060）。 乙酸銨 (NH4OAc) 購(gòu)自 Fisher Chemicals（美國(guó)新澤西州費(fèi)爾 勞恩）。

溶液與標(biāo)準(zhǔn)品 將 5 mL 甲酸加入 95 mL ACN 中新鮮制得甲酸 (5%) ACN 溶液。 將 19.27 g NH4OAc 溶解于 250 mL Milli-Q 水中制得乙酸銨儲(chǔ)備 液 (1 M)。該溶液保存于 4 °C。將 5 mL 1 M 乙酸銨儲(chǔ)備液加入 1 L Milli-Q 水中，制得 5 mM 乙酸銨水溶液。 標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo) (IS) 儲(chǔ)備液采用 DMSO 進(jìn)行配制，除達(dá)氟沙星與環(huán) 丙沙星的 DMSO 儲(chǔ)備液濃度分別為 1.0 mg/mL 和 0.25 mg/mL 外，其他儲(chǔ)備液濃度均為 2.0 mg/mL。阿莫西林和頭孢唑啉儲(chǔ)備液采用水進(jìn)行配制，濃度為 2.0 mg/mL。除阿莫西林和頭孢唑啉 儲(chǔ)備液用塑料瓶配制以外，其他所有儲(chǔ)備液均在棕色玻璃瓶中進(jìn) 行配制。所有儲(chǔ)備液均保存于 -20 °C 下。根據(jù)儀器響應(yīng)不同，將 30 種化合物分為兩組 G1 和 G2。在 1/1 的 ACN/水中配制得到 25/5 µg/mL 的混合 (G1/G2) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。氟尼辛-d3 內(nèi)標(biāo)工作 溶液 (25 µg/mL) 也采用 1/1 的 ACN/水進(jìn)行配制。

設(shè)備 樣品前處理所用的設(shè)備和材料包括： • Geno/Grinder（SPEX，美國(guó)新澤西州墨圖根） • Centra CL3R 離心機(jī)（Thermo IEC，美國(guó)馬薩諸塞州） • Eppendorf 微型離心機(jī)（Brinkmann Instruments，美國(guó)紐 約州韋斯特伯里） • 渦旋儀和多管渦旋儀（VWR，美國(guó)賓夕法尼亞州拉德諾） • 瓶口分液器（VWR， 美國(guó)新澤西州南普蘭菲爾德） • Eppendorf 移液管和重復(fù)用吸管• Agilent Bond Elut EMR-Lipid 增強(qiáng)型脂質(zhì)去除凈化管 （部件號(hào) 5982-1010） Agilent Bond Elut EMR-Lipid Polish 反萃管 （部件號(hào) 5982-0101）

儀器 實(shí)驗(yàn)采用 Agilent 1290 Infinity LC 進(jìn)行分析，其中包括： • Agilent 1290 Infinity 四元泵 (G4204A) • 配備 Agilent 1290 Infinity 自動(dòng)進(jìn)樣器溫控器 (G1330B) 的 Agilent 1290 Infinity 高性能自動(dòng)進(jìn)樣器 (G4226A)，以及 Agilent 1290 Infinity 柱溫箱 (G1316C) 該 UHPLC 系統(tǒng)聯(lián)用配備安捷倫噴射流電噴霧離子源并采用 iFunnel 技術(shù)的 Agilent 6490 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)。采用 Agilent MassHunter 工作站軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和分析。