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豬肉和牛奶中的獸藥檢測-配備標準 ESI 離子源的 Ultivo
閱讀：698 發(fā)布時間：2021-3-27摘要：本應用簡報重點介紹了一種 10 分鐘的分析方法，用于定量豬肉和牛奶中 12 種 受法規(guī)監(jiān)管的獸藥化合物。該方法將 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀與 配備 ESI 離子源的 Agilent Ultivo 三重四極桿液質聯(lián)用系統(tǒng)結合使用。根據(jù)法規(guī)的規(guī)定，本方法選擇用于評估的 12 種獸藥化合物最大殘留* (MRL) 高達 1000 µg/kg，需要進行分析的濃度高達 MRL 的 5 倍。Ultivo 的直觀設計和易維護性 使該系統(tǒng)非常適合用于上述獸藥的高通量檢測。選擇豬肉糜和牛奶代表脂肪和水含 量較高的多種基質。該方法超出了法規(guī)規(guī)定的靈敏度要求，該方法中所有獸藥 化合物均具表現(xiàn)出高精度 (RSD% < 14%)。
前言：獸藥主要用于預防牲畜疾病和寄生蟲，促 進生長。畜牧業(yè)中獸藥使用不當會導致 這些藥物在動物組織和其他動物源性食品 （如牛奶或雞蛋）中積聚。鑒于世界各地 對人食用畜牧產品中存在獸藥的關注， AOAC 工作組近期對大量獸藥化合物提出 了標準方法性能要求 (SMPR)，其中包括 根據(jù)美國[1]、Codex[2]、中國[3] 和加拿大[4] 法規(guī)的肉類和牛奶中獸藥殘留的檢測限。 檢測限要求規(guī)定為 MRL 的一半，始終將 各監(jiān)管機構中的低MRL 選為默認值。 該方法中包括的 12 種獸藥代表一組獸 藥，其在牛奶和肉類中的 MRL 相對較 高。每種獸藥化合物都有目標檢測濃 度，定義為化合物 MRL 的 1/2。12 種 研究化合物的目標檢測濃度范圍為牛奶 中 22.5–100 µg/kg，肉中 50–500 µg/kg （表 1）。配備標準 ESI 離子源的 Ultivo 三 重四極桿液質聯(lián)用系統(tǒng)是用于這類測量的 理想系統(tǒng)。
本應用簡報展示將 1260 Infinity II Prime 液相色譜系統(tǒng)和配備 ESI 離子源的 Ultivo LC/TQ 聯(lián)用，對豬肉和牛奶中 12 種受監(jiān) 管獸藥化合物進行定量。Ultivo-ESI 具有與 Ultivo 系統(tǒng)相媲美的出色性能。
實驗部分： 試劑與化學品 使用的所有試劑均為 HPLC 或 LC/MS 級。 乙腈和甲醇購自 Honeywell (Morristown, NJ, USA)，超純水產自配有 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式終端過濾器濾 芯的 Milli-Q Integral 水純化系統(tǒng) (EMD Millipore, Billerica, MA, USA)。甲酸購自 Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ, USA)， 氟化銨（固體粉末）購自 Aldrich (SigmaAldrich Corp., St. Louis, MO, USA)，配制 5 mol/L 儲備液。獸藥標準品購自 SigmaAldrich。
樣品前處理 新鮮的 2% 巴氏殺菌有機牛奶和無抗生素 豬肉（80% 瘦肉，20% 肥肉）購自當?shù)?商店。將 2 g 豬肉或牛奶樣品在 50 mL 聚 丙烯試管中稱重，冷凍待分析。豬肉樣 品前處理步驟摘自 Zhao等[5] 之前評估的 方法。本方法進一步對牛奶萃取進行了 改進，總結于圖 2 中。使用 Heidolph HeiMIX Multi Reax 系統(tǒng)對樣品進行渦旋混 合。使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 過濾 柱，6 mL，600 mg（部件號 5190-1004） 進行豬肉萃取液的最終凈化。Captiva EMR-Lipid 過濾柱可高效并選擇性去除 脂質，同時具有出色的疏水性分析物回 收率。
儀器 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀 • 1260 Infinity II Prime 全能泵 (G7104C) • 1260 Infinity II Multisampler，配備 冷卻裝置 (G7167A) • 1260 Infinity II 高容量柱溫箱 (G7116A) Agilent Ultivo 三重四極桿液質聯(lián)用系統(tǒng) • 電噴霧離子源 (G1948B)
方法 表 2 總結了 1260 Infinity II Prime 液相色 譜條件，表 3 總結了 Ultivo 離子源和儀器 參數(shù)。表 4 顯示了目標化合物的優(yōu)化 MS 參數(shù)。動態(tài)多反應監(jiān)測 (dMRM) 用于數(shù) 據(jù)收集。MassHunter 定量分析軟件 B.09 具有 Quant-My-Way 功能，用于加速和簡 化數(shù)據(jù)分析和審查過程。
實驗設計 在萃取流程后對豬肉和牛奶進行加標（后 加標），用于靈敏度、精度和線性研究。 對于回收率評估，將豬肉和牛奶在萃取前 加標至獸藥儲備液（預加標），并與后加 標豬肉和牛奶萃取物進行比較，以便在分 析后進行回收率 (%) 計算。
結果與討論:方法靈敏度和精度 所有獸藥均可在 1/2 MRL 下準確定量， 大多數(shù)獸藥可在 1/10 MRL 下進行定量， 后者是本研究中檢測的低濃度。圖 3 顯示了豬肉萃取液中目標檢測濃度下所有 分析物的出色信號響應。獸藥在低檢測 濃度下也表現(xiàn)了出色的精度，所有化合物 的 RSD% 均低于 14%，每種化合物采用低檢測濃度，如表 5 所示。低檢測 濃度下的準確定量是指六次重復進樣中 四次精度達到 80%–120%，且定量離子 和定性離子的信噪比 (S/N) 大于 10。多 種獸藥化合物在 1/10 MRL 下具有*的 信號響應，表明定量限遠低于 1/10 MRL （圖 4 中包括一些示例）。