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使用安捷倫液質(zhì)聯(lián)用分析牛肉中的多類別獸藥多殘留
閱讀：701 發(fā)布時(shí)間：2021-1-14摘要： Agilent Captiva 增強(qiáng)型脂質(zhì)去除 (EMR-Lipid) 過(guò)濾柱是第二代 Agilent EMR-Lipid 產(chǎn)品，采用固相萃取 (SPE) 形式，用于在不影響分析物回收率的情況下實(shí)現(xiàn)高選擇性脂質(zhì)去除。SPE 過(guò)濾柱提供了簡(jiǎn)便的直通式凈化工作流程，只需極少的方法開(kāi)發(fā)。萃取管經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可在大體積樣品凈化過(guò)程中重力自洗脫，免除了控制真空或壓力的麻煩。為促進(jìn)脂類捕獲并提高疏水性化合物的回收率，需要在 Captiva EMR-Lipid 吸附劑中加入 20% 水以活化 EMR 凈化吸附劑。本研究展示了 Captiva EMR-Lipid 在分析牛肉中 39 種代表性多類別獸藥中的應(yīng)用。采用兩步樣品萃取，使親水性和疏水性化合物均獲得滿意的回收率。然后將萃取液混合并加載到 Captiva EMR-Lipid 過(guò)濾柱上進(jìn)行凈化。評(píng)估了該方法的基質(zhì)效應(yīng)、分析物回收率和方法重現(xiàn)性。與其他過(guò)濾柱直通式凈化產(chǎn)品相比，Captiva EMR-Lipid 過(guò)濾柱提供了更高效的基質(zhì)凈化和更出色的疏水性分析物回收率。
前言：獸藥廣泛用于動(dòng)物食品中以預(yù)防動(dòng)物疾病或作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑。這些藥物可能在動(dòng)物組織中發(fā)生富集，使用不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致藥物殘留于食用組織中，對(duì)人類健康構(gòu)成威脅。隨著公眾對(duì)食品安全的日益關(guān)注，大多數(shù)國(guó)家/地區(qū)都會(huì)對(duì)動(dòng)物食品生產(chǎn)中使用的獸藥進(jìn)行監(jiān)管1,2。動(dòng)物食品（如肌肉、肝臟和蛋類）屬于復(fù)雜基質(zhì)；因此有必要在儀器分析之前使用高效前處理方法進(jìn)行樣品萃取、凈化和濃縮。已有的樣品前處理方法包括傳統(tǒng)的溶劑萃取、固相萃取 (SPE) 或幾項(xiàng)技術(shù)的組合。這些方法通常費(fèi)力費(fèi)時(shí)，僅適用于有限的化合物類別，并且需要進(jìn)行方法開(kāi)發(fā)。多類別多殘留方法在監(jiān)管性監(jiān)測(cè)項(xiàng)目中越來(lái)越受青睞，因?yàn)樗鼈兛梢詳U(kuò)大分析范圍并提高實(shí)驗(yàn)室效率。過(guò)去幾年，文獻(xiàn)中已經(jīng)報(bào)道了對(duì) 100 多種獸藥的分析3-5。樣品前處理通常涉及采用乙腈 (ACN)/水混合物進(jìn)行預(yù)萃取，然后采用 C18 凈化或其他凈化技術(shù)的組合。然而，現(xiàn)有凈化技術(shù)存在脂質(zhì)去除效率低下和分析物意外損失等局限性。ACN/水混合物直接萃取可能影響萃取步驟中的蛋白質(zhì)去除效率和疏水性分析物的可萃取性。安捷倫增強(qiáng)型脂質(zhì)去除 (EMR-Lipid) dSPE 凈化產(chǎn)品自 2015 年推出以來(lái)備受關(guān)注。EMR-Lipid 吸附劑通過(guò)體積排阻和疏水相互作用的組合機(jī)制，與脂類化合物的非支化烴鏈發(fā)生特異性相互作用。這種組合機(jī)制提供了高選擇性脂質(zhì)去除，且對(duì)目標(biāo)分析物沒(méi)有不良影響。該技術(shù)已被用于復(fù)雜基質(zhì)中的多類別多殘留農(nóng)藥分析，可提供基質(zhì)凈化和結(jié)果6,7。第二代產(chǎn)品 Agilent Captiva EMR-Lipid 過(guò)濾柱減少了吸附劑活化所需的水分比例，且隨后無(wú)需 Polish 凈化鹽析萃取步驟。這樣簡(jiǎn)化了工作流程并改善了疏水性化合物在凈化過(guò)程中的溶解度。
本研究考察了 Captiva EMR-Lipid 過(guò)濾柱凈化在分析牛肉中 39 種棘手的代表性獸藥的樣品前處理過(guò)程中的應(yīng)用。所選擇的代表性獸藥涉及 17 種不同類別，包括親水性和疏水性藥物，酸性、中性和堿性藥物，以及一些難分析的類別，如四環(huán)素和 β-內(nèi)酰胺。表 1 列出了藥物類別、法規(guī)信息、保留時(shí)間以及用于分析這些獸藥的 MS/MS 條件。
實(shí)驗(yàn)部分：試劑與化學(xué)品所有試劑和溶劑均為 HPLC 或分析純級(jí)。乙腈 (ACN) 購(gòu)自 Honeywell (Muskegon, MI, USA)。二甲基亞砜 (DMSO) 和脫水乙二胺四乙酸二鈉鹽 (NaEDTA) 購(gòu)自 Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA)。試劑級(jí)甲酸 (FA) 購(gòu)自安捷倫公司（部件號(hào) G2453- 86060）。獸藥標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)購(gòu)自 Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA)。溶液與標(biāo)樣用 DMSO 配制 2.0 mg/mL 的標(biāo)樣和內(nèi)標(biāo) (IS) 儲(chǔ)備液，以下儲(chǔ)備液除外： • 用 DMSO 配制 1.0 mg/mL 的達(dá)氟沙星儲(chǔ)備液 • 用 DMSO 配制 0.25 mg/mL 的環(huán)丙沙星儲(chǔ)備液用水配制所有 β-內(nèi)酰胺藥物和頭孢唑啉儲(chǔ)備液，濃度為 2.0 mg/mL。除 β-內(nèi)酰胺藥物、頭孢唑啉和四環(huán)素藥物儲(chǔ)備液在聚丙烯塑料管中配制以外，所有其他儲(chǔ)備液均在棕色玻璃樣品瓶中配制。所有溶液均保存于 -20 °C 下。根據(jù)其儀器響應(yīng)不同，將 39 種化合物分為兩組：第 1 組 (G1) 和第 2 組 (G2)。在 1:1 ACN/水中配制兩種混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度分別為 25/5 µg/mL 和 5/1 µg/mL (G1/G2)。在 1:1 ACN/水中配制 25 µg/mL 氟尼辛-d3 IS 工作溶液。將 2 mL 甲酸和 2 mL DMSO 加入 100 mL 經(jīng)預(yù)冷卻的 ACN，每天新鮮配制冷萃取溶劑。將 1.8612 g NaEDTA 粉末溶于 50 mL Milli-Q 水中，制得 0.1 M NaEDTA 溶液。溶液在室溫下保存。混合 80 mL ACN 與 20 mL Milli-Q 水，制得 80:20 ACN/水。
結(jié)果與討論：簡(jiǎn)便易用的過(guò)濾柱凈化使用 Captiva EMR-Lipid 過(guò)濾柱進(jìn)行復(fù)雜樣品基質(zhì)凈化的一個(gè)重要特征是簡(jiǎn)便易用。EMR-Lipid 吸附劑針對(duì)的是不需要的脂質(zhì)干擾物而非分析物，并采用直通方法。將樣品混合物加載到過(guò)濾柱上，使其穿過(guò)過(guò)濾柱中填充的 Captiva EMR-Lipid 吸附劑。脂類被捕集在吸附劑中，而目標(biāo)分析物穿過(guò)過(guò)濾柱，無(wú)需活化、清洗和洗脫等傳統(tǒng)的 SPE 步驟。因此，使用 Captiva EMR-Lipid 過(guò)濾柱大大簡(jiǎn)化了凈化過(guò)程，節(jié)省了大量時(shí)間和吸附劑。直通式凈化無(wú)需針對(duì)清洗和洗脫步驟進(jìn)行傳統(tǒng)的 SPE 方法開(kāi)發(fā)。對(duì) Captiva EMR-Lipid 的一種可能的方法改型是使用二次洗脫步驟以實(shí)現(xiàn)*洗脫。在二次洗脫時(shí)，建議使用 20:80 水/ACN 混合物，其體積為載樣體積的 20%–25% 左右（例如，在載樣體積為 5 mL 時(shí)，采用 1–1.25 mL 進(jìn)行二次洗脫）。后，重力洗脫的產(chǎn)品設(shè)計(jì)使樣品在加載到 EMR-Lipid 過(guò)濾柱上之后即可自動(dòng)操作。無(wú)需通過(guò)調(diào)節(jié)真空度或正壓來(lái)控制洗脫流速。這些特征使得在采用 Captiva EMR-Lipid 過(guò)濾柱凈化來(lái)制備復(fù)雜的食品樣品時(shí)，可獲得更高的實(shí)驗(yàn)室工作效率。