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模擬安捷倫1200 系列四元液相色譜儀分析抗組胺
閱讀：637 發(fā)布時間：2020-12-24摘要：安捷倫的智能系統(tǒng)模擬技術 (ISET) 可實現(xiàn)常規(guī)液相色譜系統(tǒng)分析方法的無縫轉(zhuǎn)移，例如 Agilent 1200 系列四元液相色譜儀到 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀。本應用簡報展示了 ISET 在分析五種抗組胺藥物方面的優(yōu)勢。對不同實驗的保留時間與分離度進行評估，并與采用 1200 系列四元液相色譜儀獲得的原始數(shù)據(jù)進行比較。通過啟用 ISET，兩種系統(tǒng)獲得了良好的一致性。
前言從常規(guī) HPLC 系統(tǒng)到 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀等 UHPLC 系統(tǒng)的分析方法轉(zhuǎn)移，對各種實驗室都是重要而且通常很關鍵的問題，對處于嚴格監(jiān)管環(huán)境下的實驗室更是如此。UHPLC 系統(tǒng)與常規(guī) HPLC 系統(tǒng)相比具有更低的系統(tǒng)延遲體積，并且通常會表現(xiàn)出不同的泵混合行為。這些特性可能會導致儀器間的方法轉(zhuǎn)移產(chǎn)生不同的保留時間 (RT) 和分離度。為避免對傳統(tǒng)分析方法進行費時又昂貴的重新驗證，可以在開始運行時配置等度保持或部署安裝額外延遲體積1 。而采用本方法時僅需要考慮延遲體積，而不用擔心兩種分析泵混合行為的差異。安捷倫的智能系統(tǒng)模擬技術 (ISET) 可實現(xiàn)無縫的方法轉(zhuǎn)移，并能夠獲得相似的色譜結(jié)果2 。通過啟用 ISET，無需改變分析方法或修改液相色譜系統(tǒng)就可以補償延遲體積和泵混合行為的差異。本應用簡報介紹了五種抗組胺藥物混合物的分離方法。首先將該藥物混合物在 Agilent 1200 系列四元液相色譜儀上進行分析。然后將分析方法轉(zhuǎn)移至 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀，并分別選擇啟用與不啟用 ISET 功能進行實驗。在額外實驗中使用 ISET 的微調(diào)選項來展示如何對分析方法轉(zhuǎn)移進一步優(yōu)化。對保留時間與分離度進行評估，并與采用 1200 系列四元液相色譜儀的結(jié)果進行比較。
實驗部分儀器采用以下儀器對抗組胺藥物進行分析。 Agilent 1200 系列四元液相色譜儀： • Agilent 1200 系列四元泵 (G1311A) • Agilent 1200 系列自動進樣器 (G1329A) • Agilent 1200 系列柱溫箱 (G1316A) • Agilent 1200 系列二極管陣列檢測器 (G1315D) Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀： • Agilent 1260 Infinity II 全能泵 (G7104C) • Agilent 1260 Infinity II Multisampler (G7167A)，配備集成式樣品冷卻裝置（選件 #100） • Agilent 1260 Infinity II 高容量柱溫箱 (G7116A) • Agilent 1260 II 二極管陣列檢測器 (G7117C)
軟件 Agilent OpenLAB CDS 2.2 (M8413A) 樣品五種抗組胺藥物混合物，每種濃度為 150 ng/µL（按洗脫順序排列）：曲吡那敏、氯苯那敏、丁卡因、異丙嗪和西替利嗪?；瘜W品所有試劑均為液相色譜級。新制超純水產(chǎn)自配置 0.22 µm 膜式終端過濾器 (Millipak) 的 Milli-Q Integral 水純化系統(tǒng)。所有抗組胺藥物均購自 Sigma-Aldrich 公司 (St. Louis, USA)。
結(jié)果與討論：采用常規(guī)分析方法在 1200 系列四元液相色譜儀上使用填充 3.5 µm 填料的 4.6 × 75 mm 色譜柱對五種抗組胺藥物進行分析。首先，在不啟用 ISET 的狀態(tài)下將分析方法轉(zhuǎn)移至 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀。與預期結(jié)果相同，所有五種分析物保留時間均明顯提前。接下來，啟用 ISET 功能。圖 1 所示為疊加色譜圖，包括使用 1200 系列四元液相色譜儀的原始色譜圖以及啟用和不啟用 ISET 時采用 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀測得的兩幅色譜圖。使用 ISET 時，抗組胺藥物的 RT 能夠與原始色譜圖保持一致，并顯示 RT 偏差小于 3%，很好地滿足了 ISET 指標 5%2 的要求。相比之下，不使用 ISET 時，RT 偏移在 5% 至約 11% 之間。為進一步優(yōu)化保留時間的一致性，需要激活 ISET 的微調(diào)功能。延遲體積偏移為 –50 µL 時，所有峰的保留時間略微提前。圖 2 所示為疊加色譜圖，包括原始色譜圖以及 ISET 激活與未激活微調(diào)功能時采用 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀獲得的兩幅色譜圖。由于配置了微調(diào)功能，五種抗組胺藥物的 RT 與原始色譜圖一致，并顯示保留時間偏移的偏差小于 0.5%。表 2 所示為進行實驗的保留時間數(shù)據(jù)概覽。