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摘要：本文介紹了使用 Agilent AdvanceBio SEC 色譜柱及 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)對 18 種抗生素進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)分析的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)使用《中國藥典》建議的流動相，能夠獲得出色的分離度及穩(wěn)定的分析結(jié)果。本文提供的相關(guān)圖譜可作為抗生素 SEC 分析的參考。

前言：抗生素是臨床常用的藥物之一，較易發(fā)生過敏反應(yīng)?？股刂械母叻肿泳酆衔镫s質(zhì)是引發(fā)過敏反應(yīng)的真正過敏原，因此嚴(yán)格控制抗生素藥物中的高分子聚合物含量具有重要意義。聚合物含量通常照分子排阻色譜法測定。目前大多采用葡聚糖凝膠柱，但此類填料的機(jī)械強(qiáng)度差且柱效低，因此聚合物分析填料逐漸發(fā)展為球狀親水硅膠。

《中國藥典》已有數(shù)個品種以有關(guān)物質(zhì) II 的檢測項(xiàng)目形式收載了使用球狀親水硅膠 SEC 的方法1 。目前市面上主要有兩種類型的球狀親水硅膠基質(zhì)：鍵合二醇基的硅膠 (USP L20) 和鍵合親水涂層的硅膠 (USP L59)。較為傳統(tǒng)的 USP L20 鍵合相由于存在較多的殘留硅醇基，通常需要較高離子強(qiáng)度的流動相以克服非特異性相互作用。而 Agilent AdvanceBio SEC 色譜柱（L59 型）采用聚合物親水涂層，殘留硅醇基數(shù)目大幅減少，從而能夠有效抑制非特異性相互作用，實(shí)現(xiàn)聚集體的準(zhǔn)確定量分析。此外，2.7 μm的填料粒徑以及更大的孔容設(shè)計(jì)，都有助于進(jìn)一步提升色譜分離效果。

 

實(shí)驗(yàn)部分：試劑和樣品無水磷酸二氫鈉與十二水合磷酸氫二鈉均購自 Sigma-Aldrich 公司。實(shí)驗(yàn)用水取自 Merck Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)。磷酸鹽緩沖液：5 mmol/L Na2HPO4:5 mmol/L NaH2PO4 (61:39)。所有樣品均為實(shí)際樣品。樣品均為市購產(chǎn)品。樣品溶解于流動相后過 0.22 µm 濾膜。樣品濃度均為 1 mg/mL。儀器和設(shè)備本實(shí)驗(yàn)采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)，該系統(tǒng)配備二極管陣列檢測器。所用色譜柱為 Agilent AdvanceBio SEC 130Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm（部件號：PL1180-5350）。樣品前處理準(zhǔn)確稱取 10 mg 抗生素粉末狀樣品于 10 mL 離心管內(nèi)，加入流動相 10 mL 后，超聲 1 分鐘。經(jīng) 0.22 µm 濾膜過濾后，取續(xù)濾液進(jìn)樣分析。色譜條件色譜柱：AdvanceBio SEC 130Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm（部件號： PL1180-5350）流動相：5 mmol/L 磷酸鹽緩沖液（含 5% 乙腈），pH 7.0 進(jìn)樣量：5 μL 柱溫：25 ℃ 流速：0.6 mL/min 等度運(yùn)行檢測波長：254 nm

結(jié)果與討論：本實(shí)驗(yàn)采用了 Agilent AdvanceBio SEC 色譜柱和 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)對阿莫西林、頭孢氨芐、頭孢丙烯、頭孢地尼、頭孢地嗪、頭孢克洛、頭孢拉定、頭孢美唑、頭孢米諾鈉、頭孢哌酮鈉、頭孢匹羅、頭孢羥氨芐、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢西林鈉、頭孢唑肟鈉共 18 種抗生素進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)分析，并獲得了分離結(jié)果，

與 TSK G2000SWxl 相比，AdvanceBio SEC 色譜柱擁有更好的分離度與分離效率，色譜柱塔板數(shù)是 TSK 同規(guī)格產(chǎn)品的近 2 倍。AdvanceBio SEC 色譜柱能耐受更高的壓力，機(jī)械強(qiáng)度更高，AdvanceBio SEC 色譜柱在前述條件下壓力約為 100 bar， AdvanceBio SEC 色譜柱耐壓 400 bar，推薦操作壓力不超過 200 bar，色譜柱壽命明顯延長。每份樣品均重復(fù)進(jìn)樣 3 次，保留時間無明顯漂移，結(jié)果重復(fù)性良好。

結(jié)論:本文使用 AdvanceBio SEC 130 , 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色譜柱，采用《中國藥典》現(xiàn)有球狀親水硅膠 SEC 柱的分析方法，對 18 種抗生素進(jìn)行了有關(guān)物質(zhì)分析，分離度與 TSK G2000SWxl 相比提升 20%；傳統(tǒng) G-10 柱聚合物峰與主峰不能達(dá)到基線分離，使用 AdvanceBio SEC 130 , 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色譜柱，主峰相鄰峰與主峰基本能實(shí)現(xiàn)基線分離，獲得了出色的分離度及穩(wěn)定的結(jié)果 。該方法可以作為各個生產(chǎn)企業(yè)及檢測機(jī)構(gòu)抗生素質(zhì)量控制中有關(guān)物質(zhì) II 檢項(xiàng)的參考。