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三重四級(jí)桿液質(zhì)測(cè)定動(dòng)物源性食品中硝基咪唑類藥物
閱讀：1223 發(fā)布時(shí)間：2019-12-27摘要：本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)采用 Captiva EMR-Lipid 對(duì)雞肉、豬肉和豬肝樣品中的 7 種硝基咪唑類藥物進(jìn) 行萃取凈化后，在安捷倫三重四級(jí)桿液質(zhì)上進(jìn)樣分析。前處理過(guò)程簡(jiǎn)單、快速并且分析結(jié) 果符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求的檢測(cè)限與定量限，以及可接受的加標(biāo)回收率。
前言：硝基咪唑類藥物是一類抗生素和抗原蟲藥，主要用于預(yù)防和治療 家禽組織滴蟲病、球蟲病以及豬出血性腸炎等疾病，廣泛應(yīng)用于 畜禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)[3]。然而這些化合物被認(rèn)為可能對(duì)人類產(chǎn)生致 癌、致畸、致突變作用，已被美國(guó)和歐盟國(guó)家禁止使用。我國(guó)農(nóng) 業(yè)部將二甲硝基咪唑和甲硝唑列為允許作治療用、但不得在動(dòng)物 源性食品中檢出的獸藥。因此，為進(jìn)一步加強(qiáng)相關(guān)食品安全問(wèn)題 的監(jiān)管，開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速檢測(cè)動(dòng)物源性食品中硝基咪唑類 藥物及其代謝物的方法顯得十分必要。本文建立了一種將 Captiva EMR-Lipid 與三重四級(jí)桿液質(zhì)相結(jié)合同時(shí)分析 動(dòng)物源性食品中殘留的 7 種硝基咪唑類抗生素的方法。對(duì) 7 種硝 基咪唑類藥物的凈化和回收情況，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)硝基咪唑類藥物在 三種前處理方法中均具有很好的保留和洗脫性能；通過(guò)鹽析的方 法可以更好地去除極性干擾物，提高凈化效果，配合 EMR 的方法 也能達(dá)到大限度去除脂肪的作用。
實(shí)驗(yàn)部分：試劑和樣品 甲酸、乙腈均為色譜純，購(gòu)于迪馬公司；實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)過(guò)密理博 純水儀的二次水。 所用標(biāo)準(zhǔn)品包括甲硝唑 (MNZ)、二甲硝基咪唑 (DMZ)、洛硝噠 唑 (RNZ)、異丙硝唑 (IPZ)、羥基甲硝唑 (MNZOH)、羥甲基甲硝 咪唑 (HMMNI)、羥基異丙硝唑 (IPZOH)，上述標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于 99.0%，購(gòu)于 Dr 公司。 消耗品：Agilent Bond Elut QuEChERS，部件號(hào) 5982-0032； Agilent Captiva EMR-Lipid，600 mg，6 mL，部件號(hào) 5190-1004。 樣品為市售產(chǎn)品。
儀器和設(shè)備：采用 Agilent 1290 Infinity 高效液相色譜系統(tǒng)與 Agilent 6470 串聯(lián) 質(zhì)譜系統(tǒng)。
標(biāo)樣前處理：取適量的 MNZ、DMZ、RNZ、IPZ、MHZOH、HMMNI、IPZOH， 分別用甲醇配制成 100 mg/L 的單標(biāo)儲(chǔ)備液。然后取適量的各種 單標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇溶液配制成 1 mg/L 的混標(biāo)工作液。
樣品前處理：稱取樣品 5 g，加入 3 mL 水和陶瓷均質(zhì)子，渦旋混勻后，加入 10 mL 乙腈和 Bond Elut QuEChERS 獸藥殘留分析萃取鹽包（部 件號(hào)：5982-0032），渦旋振蕩 5 min；在 4 °C 下以 9000 r/min 的 轉(zhuǎn)速低溫離心 10 min；移取 4 mL 上清液至另一離心管中，再加 入 1 mL 水，充分混勻后，經(jīng)過(guò) Captiva EMR-Lipid 600 mg 過(guò)濾 柱萃取；收集流出液，在 40 °C 下用氮?dú)獯蹈桑⒂昧鲃?dòng)相定容 至 1 mL；經(jīng) Agilent Captiva 0.2 µm RC 濾膜過(guò)濾后進(jìn)行三重四級(jí)桿液質(zhì) 測(cè)定。
色譜條件 色譜柱： Agilent Poroshell 120 SB-C18 (3.0 × 100 mm, 2.7 µm) 柱溫： 30 °C 進(jìn)樣體積： 5 µL 流動(dòng)相 A： 水相（含 0.1% 甲酸） 流動(dòng)相 B： 乙腈（含 0.1% 甲酸） 流速： 0.4 mL/min 梯度程序： 時(shí)間 (min) B% 0.00 10.00 1.00 10.00 5.00 50.00 7.00 95.00 9.00 95.00 9.10 10.00 后運(yùn)行： 3 min
質(zhì)譜條件 離子源： 采用 AJS ESI，MRM 監(jiān)測(cè)模式 干燥氣溫度： 250 °C 干燥氣流速： 7 L/min 霧化器壓力： 40 psi 鞘氣溫度： 325 °C 鞘氣流速： 11 L/min 毛細(xì)管電壓： 4000 V 噴嘴電壓： 0 V 本研究所涉及的各種分析物的質(zhì)譜參數(shù)。
結(jié)果與討論 Captiva EMR-Lipid 的選擇 本研究考察了 QuEChERS、QuEChERS EMR 和 Captiva EMR-Lipid 對(duì) 7 種硝基咪唑類藥物的回收情況，僅有 MNZ-OH 極性較強(qiáng)， 易產(chǎn)生大量極性干擾，導(dǎo)致相應(yīng)抑制，其它六種硝基咪唑類藥物 在三種前處理方法中均具有很好的保留和洗脫性能。終通過(guò) 鹽析的方法可以更好地去除極性干擾物，提高凈化效果，配合 EMR 的方法也達(dá)到大限度去除脂肪的作用。因此方法配合使用 QuEChERS 獸藥萃取鹽包和 Captiva EMR-Lipid 來(lái)完成對(duì) 7 種硝基 咪唑類藥物的分析。
線性范圍與檢測(cè)限：本方法采取基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量。MNZ、DMZ、RNZ、IPZ、 MHZOH、HMMNI、IPZOH 在濃度 0.5–10 ng/mL 范圍內(nèi)線性相 關(guān)，且線性相關(guān)系數(shù)均高于 0.99。 在 S/N > 3 和 S/N > 10 的信噪比下，測(cè)得 7 種硝基咪唑類藥物在 雞肉、豬肉和豬肝中的檢測(cè)限為 0.5 µg/kg，定量限為 1 µg/kg， *可以滿足我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)方法中硝基咪唑藥物檢測(cè)限和定量限的要 求，具體檢測(cè)限和定量限數(shù)據(jù)列于表 2 中。
加標(biāo)回收率與精密度 取空白樣品進(jìn)行加標(biāo)回收和精密度實(shí)驗(yàn)，向空白雞肉、豬肉和豬 肝中添加 1 μg/kg、2 μg/kg、5 μg/kg 三個(gè)濃度水平的混標(biāo)。在不 同加標(biāo)濃度下得到的雞肉基質(zhì)中的加標(biāo)回收率在 71.9%–111.0% 之間，豬肉基質(zhì)中的加標(biāo)回收率在 79.1%–112.7% 之間，豬肝基 質(zhì)中的加標(biāo)回收率在 69.9%–114.7% 之間。雞肉基質(zhì)中的加標(biāo)回收 率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD) 小于 10.0%，豬肉基質(zhì)中的加標(biāo)回收率 RSD 小于 9.8%，豬肝基質(zhì)中的加標(biāo)回收率 RSD 小于 10.8%。
結(jié)論：本文建立了 Captiva EMR-Lipid 結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定動(dòng)物源 性食品中 7 中硝基咪唑的殘留的分析方法。方法靈敏度滿足 和國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于食品中硝基咪唑藥物大殘留*的要求[1,2]。方 法采用 Captiva EMR-Lipid 大程度去除脂肪，并且中簡(jiǎn)單易操 作，大大減少了常規(guī) SPE 時(shí)間消耗。