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樣品制備（蜂蜜）基于GB/T 18932.23-2003方法[1]：

1．稱取6 g試樣(到0.01 g)置于150mL三角瓶中，加入30mL Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液于液體混勻器上快速混合1min，使試樣*溶解。樣液倒入50mL離心管中，以3000r/min離心5min，待凈化。

2．將上清液移至下接Oasis HLB柱的貯液器中，以小于3mL/min通過Oasis固相萃取柱后，用5mL甲醇+水洗柱，棄去全部流出液。在65 kPa的負(fù)壓下抽干20min，后用15mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液于100mL圓底燒瓶中。

3．按上述方法使洗脫液在減壓情況下以小于3mL/min的流速通過陰離子交換柱,待洗脫液全部流出后，用5mL甲醇洗柱，棄去全部流出液。在65 kPa負(fù)壓下抽干5min,再用4mL流動(dòng)相洗脫，收集洗脫液于5mL樣品管中，定容至4mL，供測(cè)定。

 

四環(huán)素類藥物

四環(huán)素類(TCs)為廣譜抗菌藥，主要有以下四種：

樣品制備(肉類)

稱取5.0 g肌肉組織均質(zhì)樣品，置于50mL離心管中，加入0.75%高氯酸溶液10mL，均質(zhì)30 s，振蕩提取3min，以4000 r/min離心10min，取上清液于試管中，再重復(fù)提取一次，合并上清液于試管中。加正己烷1mL，振蕩1min，離心，除去正己烷層。水相過ODS-C18 柱（預(yù)先用5mL甲醇、2mL EDTA-Na2溶液和5mL去離子水洗過）凈化，用10mL蒸餾水洗雜質(zhì)，氮?dú)獯蹈芍?，?/span>1mL含4%甲酸的甲醇溶液以1mL/min洗脫，洗脫液用于測(cè)定。

 

注意事項(xiàng)：

1、標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶解配置儲(chǔ)備液，使用前用流動(dòng)相稀釋到濃度為1µg/mL左右。

2、因四環(huán)素和強(qiáng)力霉素為同分異構(gòu)體，[M+H]

+均為 m/z 445，需要分別優(yōu)化條件，而且優(yōu)化源參數(shù)

時(shí)，也應(yīng)分別進(jìn)樣，確定各自的保留時(shí)間，并要求基線分離，另外2種不必基線分離。

3、梯度洗脫后進(jìn)下一針樣品時(shí)一定要充分平衡。

4、用空白提取液配制同樣濃度標(biāo)樣，按相同方法進(jìn)樣，觀察色譜峰形及保留時(shí)間是否合適，峰高有

 

色譜分離條件

Agilent 1100系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng)、G1367A型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。

水相：5mmol/L 甲酸水溶液；有機(jī)相：乙腈。水相/有機(jī)相＝2/8，等度洗脫?；蛄鲃?dòng)相：乙睛+甲醇

+0.4 %甲酸溶液(18+4+78)。流速：200µL/min。

色譜柱：C18，3µm，150mm×2.0mm。

柱溫箱溫度：25℃；進(jìn)樣體積：20µL。

參考文獻(xiàn)：

1Tetracycline Residues in Honey (HPLC-MSD Method) ACC-042-V1.1,Canada.

2Official Method of Analy sis of AOAC International 17th Edition (2000) Appendix D, Appendix E.

3 蜂蜜中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素殘留量的測(cè)定方法液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T18932.23—2003.