化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
戴安離子色譜分離脈沖積分安培檢測器測定果糖二磷酸鈉及其有關(guān)物質(zhì)
閱讀：704 發(fā)布時間：2019-9-12引言
果糖二磷酸鈉注射液是一種治療低磷酸血癥的藥物，臨床上常用作心肌 缺血輔助治療藥。低磷酸血癥可在急性情況，如輸血、體外循環(huán)下進行手術(shù) 和胃腸外營養(yǎng)時出現(xiàn)，也與一些慢性疾病，如慢性酒精中毒、長期營養(yǎng)不 良、慢性呼吸衰竭中碳酸耗竭有關(guān)[1]。果糖二磷酸鈉注射液在臨床中的應(yīng)用很 廣泛，但由于其本身的結(jié)構(gòu)特點，果糖二磷酸鈉的測定多采用衍生后紫外分 光光度法；同時在果糖二磷酸鈉的生產(chǎn)過程中可能會引入雜質(zhì)，其有關(guān)物質(zhì) 有磷酸果糖、磷酸葡萄糖和果糖等，這幾種雜質(zhì)都是強極性化合物，而且含 量很低，在普通反相色譜和示差檢測器中無法檢測。有文獻報道采用紙電泳 法分離苯二胺顯色后檢測的方法，以及薄層色譜法*檢測[2-4]，也有文獻采 用固體復(fù)合酶法測定果糖二磷酸鈉的含量[5]。這幾種方法不僅操作繁瑣，且重 復(fù)性和靈敏度存在問題。
本實驗采用戴安離子色譜脈沖安培法分離測定果糖二磷酸鈉和3種有關(guān)物質(zhì)， 分離度好，靈敏度高，操作簡便。建立了一種有效檢測果糖二磷酸鈉及其有 關(guān)物質(zhì)的方法。
測試條件
儀器：戴安ICS-5000離子色譜儀（Thermo?sher公司），配四 元梯度泵，ED安培檢測器，AS-AP自動進樣器 色譜柱：CarboPac PA 20保護柱6.0 µm, 50×3 mm，（ P/N: 060144） CarboPac PA 20分離柱6.0 µm, 150×3 mm，（ P/N: 060142） 柱溫：30 ℃； 淋洗液：NaOH/ NaOAc梯度淋洗 流速：0.4 mL/min； 定量環(huán)：20 µL；
檢測方式：脈沖積分安培檢測（四電位波形）
樣品前處理
樣品稀釋適當倍數(shù)后，經(jīng)過0.22 µm尼龍濾膜過濾， 取續(xù)濾液直接上機分析。
結(jié)果和討論
色譜柱的選擇及淋洗液梯度條件優(yōu)化
果糖二磷酸鈉的結(jié)構(gòu)中含有兩個磷酸基團，可以采用 陰離子交換色譜法對其進行分離。同時其有關(guān)物質(zhì)為 磷酸果糖、磷酸葡萄糖和果糖，這些結(jié)構(gòu)中均含有羥基， 能夠在安培檢測器上有信號。為了保證色譜峰的分離度和 保留時間的合理性，我們選擇CarboPac PA 20的糖柱和 NaOH/NaOAc梯度淋洗的方式。 在上述色譜條件下幾種 物質(zhì)的色譜圖如下圖（圖1）。
重現(xiàn)性、線性和靈敏度
吸取果糖、磷酸葡萄糖、磷酸果糖和果糖二磷酸質(zhì) 量濃度為1.0 mg/L的混合標準溶液，重復(fù)進樣10次，記 錄色譜圖，它們保留時間的相對標準偏差分別為0.41%、 0.57%、0.53%，峰面積的相對標準偏差分別為1.60%、 1.14%、1.46%，峰高的相對標準偏差分別為0.54%、 0.64%、0.62%，重現(xiàn)性較好。
將標準品定量混合并將標準品溶液稀釋得到一濃度 系列，對上述系列濃度各測定3次后, 取其峰面積的平均 值，以峰面積為縱坐標，標準液質(zhì)量濃度為橫坐標建立標 準工作曲線，各種物質(zhì)的線性范圍如表1, 相關(guān)系數(shù)都在 0.9997～0.9998之間。以信噪比（S/N）為3計算檢出限， 果糖、磷酸葡萄糖、磷酸果糖和果糖二磷酸的檢出限依次 為0.010、0.010、0.020和0.10 mg/L。
實際樣品分析
市售果糖二磷酸鈉注射液，稀釋后經(jīng)過0.22 µm濾膜 過濾，按選定的色譜條件進行測定，外標法定量，其譜 圖見圖2，分析結(jié)果見表2。
結(jié)論
離子色譜分離脈沖安培檢測器測定果糖二磷酸鈉及 其有關(guān)物質(zhì)果糖、磷酸葡萄糖和磷酸果糖的方法操作簡 便，重復(fù)性好，線性范圍內(nèi)相關(guān)性好，準確度高。同時 果糖二磷酸和三種有關(guān)物質(zhì)相比靈敏度較低，在進行含 量測定時，無需較大稀釋倍數(shù)，可以減小由于稀釋倍數(shù) 過大引入的誤差。該方法可同時進行含量測定和有關(guān)物 質(zhì)分析，具有較高的實用價值。