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AB液質(zhì)聯(lián)用儀分析氯霉素的實(shí)驗(yàn)方法
閱讀：1508 發(fā)布時(shí)間：2019-8-2化學(xué)試劑
氯霉素Chloramphenicol C11H12Cl2N2O5 CAS: 56-75-7
建議的內(nèi)標(biāo)：D5-氯霉素。
色譜分離流動(dòng)相的制備：
1M 乙酸銨溶液：溶解 77g 乙酸銨于1L HPLC級(jí)的水中；
流動(dòng)相A：在1L HPLC級(jí)的水中，加入1mL甲酸、5mL 1M 乙酸銨溶液；
流動(dòng)相B：1L HPLC級(jí)的甲醇中，加入1mL甲酸、5mL 1M 乙酸銨溶液。
樣品制備(牛奶樣品)
基于Hormazabal等人提出的方法[1]：
1．量取2mL牛奶樣品；
2．加入100µL 內(nèi)標(biāo)溶(D5-氯霉素，1µg/mL)；
3．加入5mL乙腈提?。?
4．4000r/min，離心10min；
5．用5mL氯f(wàn)ang清洗上清液；
6．4000r/min，離心10min；
7．棄去上層水相；
8．N2流保護(hù)下干燥下層；
9．將殘留物溶解于100µL 甲醇中；
10．加入3mL水、0.5mL 0.5mol/L的磷酸氫二鈉(pH=6.0)；
11．將溶液加入準(zhǔn)備好的Bond Elute LMS固相提取柱；
12．分別用2mL水和0.3mL的水/甲醇沖洗；
13．用0.3mL甲醇進(jìn)行洗脫，洗脫2次；
14．N2流保護(hù)下，55℃溫和加熱至干；
15．殘留物溶解于1mL的水中；
16．用0.45µm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，備用。
樣品制備(奶粉樣品) 基于Hormazabal等人提出的方法[1]： 1．稱(chēng)量5g奶粉； 2．加入100µL內(nèi)標(biāo)溶(D5-氯霉素，1µg/mL)； 3．加入25mL水進(jìn)行稀釋?zhuān)?4．Ultra Turrax 勻漿 1min； 5．繼續(xù)使用上面牛奶處理方法(第3～16步)。
樣品制備(蜂蜜樣品1)
基于Nieland 等人提出的方法[2]：
1．溶解5g蜂蜜于20mL水中；
2．加入100µL 內(nèi)標(biāo)溶 (D5-氯霉素,1µg/mL)；
3．混旋均勻；
4．20mL乙酸乙酯，超聲提取5min；
5．4000r/min，離心10min；
6．將上清液移入玻璃試管；
7．N2流保護(hù)下55℃溫和加熱至干；
8．用1mL水溶解殘留物；
9．用0.45µm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，備用。
樣品制備(蜂蜜樣品2)
1．溶解10g蜂蜜于15mL水中；
2.．加入100µL內(nèi)標(biāo)溶 (D5-氯霉素,1µg/mL)；
3．加入Extrelut NT柱(柱容量20mL)；
4．靜置45min；
5．用40mL環(huán)己烷/乙酸乙酯(95/5)清洗2次；
6．用40mL環(huán)己烷/乙酸乙酯(50/50)洗脫2次，合并洗脫液；
7．用NaSO4干燥、過(guò)濾；
8．N2流保護(hù)下，55℃溫和加熱至干；
9．用1mL水溶解殘留物；
10．用0.45µm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，備用。
樣品制備(果凍樣品)
1．稱(chēng)量2g果凍；
2．加入100µL內(nèi)標(biāo)溶 (D5-氯霉素，1µg/mL)；
3．加入20g硅酸鎂載體(活化60～100Å孔徑)；
4．用玻璃棒勻漿；
5．準(zhǔn)備一根5g硅酸鎂的玻璃柱；
6．將勻漿混合物上到玻璃柱上；
7．用250mL乙酸乙酯/環(huán)己烷(50/50)沖洗試管、玻棒、柱子；
8．N2流保護(hù)下55℃溫和加熱至干；
9．用1mL水溶解殘留物；
10．用0.45µm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，備用。
樣品制備(魚(yú)、水產(chǎn)品)
基于Effkemann等人提出的方法[3]：
1．稱(chēng)量5g魚(yú)或其他水產(chǎn)品的組織并勻漿；
2．加入100µL 內(nèi)標(biāo)溶 (D5-氯霉素，1µg/mL)；
3．加入10mL乙酸乙酯；
4．用Ultra Turrax勻漿1min；
5．3000r/min，離心10min；
6．將上清液移入玻璃試管；
7．N2流保護(hù)下，55℃溫和加熱至干；
8．用1mL水溶解殘留物；
9．加入1mL環(huán)己烷，混勻；
10．3000r/min，離心10min；
11．轉(zhuǎn)移下層水相到樣品管中，備用。
色譜分離條件
Agilent 1100 系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng)、G1367A型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。
色譜柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50mm×2mm，4µm，80Å。
流動(dòng)相：A相—水+0.1%甲酸+5mM乙酸銨；B相—甲醇+0.1%甲酸+5mM乙酸銨。
梯度設(shè)置：
AB液質(zhì)聯(lián)用儀MS/MS 檢測(cè)
