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凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)緩沖液的更換
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)緩沖液的更換
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)及動(dòng)力學(xué)研究，包括蛋白酶親和配基CHOM的制備，蛋白酶的親和層析分離純化，凝膠電泳鑒定及分子量測(cè)定，蛋白酶的動(dòng)力學(xué)研究等。分離純化蛋白質(zhì)是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和生物功能的基礎(chǔ)。根據(jù)蛋白質(zhì)的不同性質(zhì)，分離純化的方法也是不同的。
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)緩沖液的更換
雖然更換緩沖液不能提高蛋白純度，但它卻在蛋白純化方案中起著極其重要的作用。不同的蛋白純化方法需要不同pH及不同離子強(qiáng)度的緩沖液。
假如你用硫酸銨將蛋白沉淀出來(lái)，毫無(wú)疑問(wèn)蛋白是處在高鹽環(huán)境中，需要想辦法脫鹽，可用的方法有利用半透膜透析，通過(guò)勤換透析液體去除鹽分，此法尚可，但需幾個(gè)小時(shí)，通常要過(guò)夜，也難以用予大規(guī)模純化中。
新型的設(shè)備將透析膜夾在兩個(gè)板中間，板的一側(cè)加緩沖液，另一側(cè)加需脫鹽的蛋白溶液，并在蛋白溶液一側(cè)通過(guò)泵加壓，可以使兩側(cè)溶液在數(shù)小時(shí)內(nèi)達(dá)到平衡，若增加對(duì)蛋白溶液的壓力，還可迫使水分和鹽更多通過(guò)透析膜進(jìn)入透析液達(dá)到對(duì)蛋白濃縮的目的。
也有出售的脫鹽柱，柱內(nèi)的填料是小孔徑的顆粒，蛋白分子不能進(jìn)入孔內(nèi)，先于高濃度鹽離子從柱中流出，從而使二者分離。
蛋白純化的每一步都會(huì)造成目的蛋白的丟失，緩沖液平衡的步驟尤甚。蛋白會(huì)結(jié)合在任何它能接觸的表面上，剪切力、起泡沫和離子強(qiáng)度的快速變化很容易讓蛋白失活。