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上海吉至生化科技有限公司
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2023-12-26 閱讀(757)
瑞氏染色是目前常用而又簡單的染色方法。瑞氏試劑中之酸性伊紅和堿性美藍(lán)混合經(jīng)化學(xué)作用后，變成中性之 伊紅化美藍(lán)，久置后，經(jīng)氧化而含有天青。此三種染料分別和細(xì)胞核及漿中的NH3+和COO-等結(jié)合，使細(xì)胞核及胞漿著色。由于系中性染料，又有緩沖液調(diào)節(jié)酸堿度，所以細(xì)胞受染后，藍(lán)紅等顏色都較適中，核染質(zhì)、胞漿及其中之顆粒顯色較為清楚。
瑞氏染色分兩相進(jìn)行，第一相是酸性染料伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒等結(jié)合；堿性染料天青B與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)（chro－matin）、特異中性顆粒、血小板及富含核蛋白的胞質(zhì)結(jié)合。第二相是天青B和伊紅在適宜條件下形成紫色的天青B一伊紅復(fù)合物（azure B－eosin complex），這種復(fù)合物是形成Romanowsky－Giemsa效應(yīng)的基礎(chǔ)。
Romanowsky－Giemsa效應(yīng)包括：
1. 白細(xì)胞核染色質(zhì)染成紫色，瘧原蟲的染色質(zhì)染成紅色；
2. 中性粒細(xì)胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)染成紫色；
3. 產(chǎn)生本效應(yīng)必須有兩種染料參與，一種是天青B、另一種是伊紅。
天青B與DNA分子中的磷酸基結(jié)合，而伊紅既與DNA分子中的陽離子部位結(jié)合，又與天青B結(jié)合，與天青B的結(jié)合力來源于電子供一受體的電子轉(zhuǎn)移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）與伊紅分子中的叛基（－COOH）間形成氫鍵。因此，天青B是噻嗪類染料中能與伊紅形成復(fù)合物的較佳選擇，因?yàn)閾碛兴膫€甲基側(cè)鏈的亞甲藍(lán)不能以氫鍵與伊紅結(jié)合。
甲醇除作為染料的溶劑，能將瑞氏染料解離成帶正電荷的天青B和帶負(fù)電荷伊紅外，因其具有脫水力，還可將細(xì)胞固定為一定形態(tài)，并使蛋白沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞與染料的接觸表面，增強(qiáng)染色效果。
細(xì)胞中的各種有機(jī)物質(zhì)（特別是蛋白質(zhì)）、染料等對環(huán)境的州值非常敏感。如環(huán)境偏酸，氫離子增多，降低對堿性染料的親和力；增強(qiáng)伊紅著色，出現(xiàn)異常紅染；相反，則可出現(xiàn)異常藍(lán)染。最佳環(huán)境應(yīng)維持在PH值6 4～6、8，必須使用緩沖溶液。
