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上海吉至生化科技有限公司
主營產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進(jìn)口 100g |
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2023-12-19 閱讀(1094)
臺盼藍(lán)染液是細(xì)胞活性染料，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性。細(xì)胞損傷或死亡時，臺盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以檢測細(xì)胞是否存活。
臺盼藍(lán)染色法的原理
正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi)；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。
因此，借助臺盼藍(lán)染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。
注意凋亡小體也有臺盼藍(lán)拒染現(xiàn)象。臺盼藍(lán)染色后，通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù)，就可以對細(xì)胞存活率進(jìn)行比較精確的定量。
實驗步驟：
1. 用Hanks液配制0.1%臺盼藍(lán)溶液；
2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液來消化培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞；
3. 再加入適量Hanks液制成細(xì)胞懸液；
4. 將待染色細(xì)胞稀釋至所需濃度（方法及濃度范圍與細(xì)胞計數(shù)相同）；
5. 每0.1ml細(xì)胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴，室溫下染3—5min；
6. 染色過的細(xì)胞材料，取一滴細(xì)胞懸液置玻片上，加蓋玻片后放高倍鏡下觀察；
7. 死亡的細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大，無光澤?；罴?xì)胞不著色并保持正常形態(tài)，有光澤；
8. 計數(shù)1000個細(xì)胞中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目；
9. 統(tǒng)計未染色細(xì)胞?？砂垂接嬎愠黾?xì)胞活率。
細(xì)胞活率（%）=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×100。
MTT染色原理，與臺盼藍(lán)染色原理有類似之處
活細(xì)胞中的某些物質(zhì)（線粒體中的琥珀酸脫氫酶）能夠和MTT反應(yīng)，使MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞沒有此功能。DMSO（二甲基亞砜）能夠?qū)⒋私Y(jié)晶（藍(lán)紫色甲瓚）溶解，在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm波長處測定其吸光值，能夠間接的反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)量。一定范圍內(nèi)，藍(lán)紫色結(jié)晶沉淀的數(shù)量與細(xì)胞數(shù)成正比。目前MTT法因其靈敏度高，經(jīng)濟(jì)快速等優(yōu)勢被廣泛的運(yùn)用于細(xì)胞毒性試驗，腫瘤藥物的篩選、放射敏感性測定和對某些生物活性因子的活性檢測（原核真核蛋白表達(dá)）等方面。對細(xì)胞活力有影響的表達(dá)蛋白活性檢測可以通過MTT比色法進(jìn)行。
