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上海吉至生化科技有限公司
主營產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進(jìn)口 100g |
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2023-3-24 閱讀(556)
1.細(xì)菌繁殖：LB培養(yǎng)基，2ml / 20ml，37℃，200rpm，搖動(dòng)過夜；
2.離心10分鐘，轉(zhuǎn)速為5000 rpm，4°C；丟棄液體；
3.用預(yù)冷的TES緩沖液洗滌沉淀物（細(xì)胞），在4°C下以10 rpm，5 000 rpm離心10分鐘，加入預(yù)冷的1 ml溶液I，并冰浴10分鐘；
4.重懸，加入150ul溶菌酶母液，在室溫下靜置5分鐘；
5.添加1.2ml的溶液II并在冰浴上保持5分鐘；
6.加入0.9 ml預(yù)冷的乙酸鉀，混合均勻，在4°C下以12 000 rpm離心10分鐘；
7.加入1.5 ml異丙醇，并將其放在-20°C的冰箱中放置15分鐘；
8.在4°C下以12 000 rpm離心10分鐘；
9.取沉淀并將其懸浮在400 ul TE緩沖液中；
10.添加40ul 3M NaAc；
11.phenol/Trichloromethane，萃取，乙醇沉淀；
12.在4°C下以12 000 rpm離心10分鐘；
13.取出沉淀物，將其冷凍干燥，然后重懸于50ul TE緩沖液中；
14.電泳檢測(cè)提取的DNA的質(zhì)量。
