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上海吉至生化科技有限公司
主營產品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進口 100g |
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2021-10-22 閱讀(682)
固體和半固體樣品：
稱取25g樣品，置于225mL生理鹽水的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打lmin～2min制成1:10的樣品勻液；或置于盛有225mL滅菌生理鹽水的無菌均質杯中,8000r/min～10000r/min均質lmin～2min制成1:10的樣品勻液。
液體樣品：
應先將其充分搖勻后,以無菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中,充分振搖﹐制成1:10的樣品勻液。
樣品稀釋：
用1mL無菌吸管或微量移液器吸取l:10樣品勻液lmL,沿管壁緩慢注于裝有9mL生理鹽水的無菌試管中。
另取1mL無菌吸管或微量移液器吸頭,按上述操作順序,做10倍遞增樣品勻液,每遞增稀釋一次,即換用1次lml滅菌吸管或吸頭。
培養(yǎng)：
根據對待檢樣品菌含量的估計,選擇2個～3個連續(xù)的適宜稀釋度﹐每個稀釋度水浴80℃±l℃維持10min,吸取菌液0.2 mL接種于營養(yǎng)瓊脂平板內,使用涂布棒盡可能小心快速地涂布接種液于瓊脂表面,涂布棒不得接觸平皿邊緣。每個稀釋度接種2個平板。涂布后,將平板靜置10min使接種物*被培養(yǎng)基吸收。翻轉平皿置于37℃±1℃厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h±2h。
菌落計數：
選取特征菌落數在20CFU～200CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于20CFU的平板記錄具體菌落數,大于200CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。
其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數；若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數。
當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數。
菌落挑選和純培養(yǎng)：
挑選平板上5個白色不透明、濕潤、邊緣光滑的菌落分別轉入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基37℃±1℃厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h±2h后進行形態(tài)學、生化鑒定。
形態(tài)學鑒定：
革蘭氏染色,鏡檢。地衣芽孢桿菌為革蘭氏陽性桿菌,呈桿狀,長度1.5u.m～3.5um,單個、成對或短鏈狀排列,有芽孢，芽孢橢圓形，中生或近中生，芽孢囊不明顯膨大。
生化鑒定：
使用細菌生化鑒定試劑盒進行生化鑒定。
