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上海吉至生化科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進(jìn)口 100g |
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2021-9-16 閱讀(443)
1.先制備Percoll儲(chǔ)存液：Percoll原液（100%）:0.9%NaCl的體積比為9：1。
2.取一50mlPolyethylene pipe，無菌采集人外周靜脈血，加4.4ml3.8%或5%的檸檬酸鹽液定容至40ml。上述全血300gX20min，離心，室溫。
3.吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制備無血小板血漿（platelet-poor Plasma, PPP）。
4.余下的沉降全血加入5ml 6%Dextran (分子量500,000，用無菌生理鹽水配制)，并用生理鹽水（0.9%）調(diào)節(jié)最終體積至50ml，輕輕、*混勻。室溫沉降30min。
5.吸出富含白細(xì)胞的上層液，275gX6min。
6.沉淀的細(xì)胞用2~3mlPPP重懸。
7.在一15ml離心管中依次加入2ml42%、2ml51%Percoll(均為用PPP新鮮配制)、2~3ml細(xì)胞懸液，275gX10min。
8.單個(gè)核細(xì)胞及部分血小板位于血漿與42%Percoll液之間，中性粒細(xì)胞位于42%Percoll與51%Percoll之間。血小板可通過25%Percoll離心5min去除，也可在原密度梯度中加入第三個(gè)25%Percoll一起離心去除。
9.中性粒細(xì)胞層用PPP液冼1次，再用含糖的Krebs-Ringer磷酸緩沖液（KRPD，PH7.23）洗1次。
10.用這種方法可得80%中性粒細(xì)胞，純度在95%以上。
