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            技術(shù)文章

            穩(wěn)定細胞株篩選

            閱讀:478          發(fā)布時間:2022-1-27

            方法一:先把質(zhì)粒整合到染色體上后,用相應(yīng)的質(zhì)粒DNA中的抗性標(biāo)志來篩選該細胞系,單克隆篩選穩(wěn)定細胞株。

            第一步:篩選濃度測定,以10~14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度;

            第二步:進行細胞接種,轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞,各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細胞密度應(yīng)達到60%~80% 覆蓋;

            第三步:進行細胞轉(zhuǎn)染

            第四步:利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進行篩選,并鑒定篩選結(jié)果。


            方法二:應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒,慢病毒轉(zhuǎn)染,篩選穩(wěn)定細胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組。轉(zhuǎn)染得到穩(wěn)定細胞株的效率高,是建立穩(wěn)定株的*方式。

            第一步:將人源化的抗體基因轉(zhuǎn)接到慢病毒載體上,

            第二步:使用包裝細胞,一般為293細胞,包裝出病毒,不同類型病毒包裝時間一般在3-5天。

            第三步:用病毒轉(zhuǎn)染目的細胞。包裝好的病毒要先測滴度,根據(jù)滴度決定轉(zhuǎn)染目的細胞的病毒量。

            第四步:后期篩選。轉(zhuǎn)染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩(wěn)定細胞株。


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