化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人角膜內(nèi)皮采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人角膜內(nèi)皮經(jīng)NSE（元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人角膜內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 眼角膜組織 |
英文名稱 | Human Corneal Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7423 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。角膜的高度透明性和光學(xué)性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一，而角膜內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細(xì)胞是角膜內(nèi)層的單層細(xì)胞，構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài)，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能出現(xiàn)紊亂，常導(dǎo)致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性。角膜內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內(nèi)皮細(xì)胞對角膜透明性有重要作用；③角膜內(nèi)皮細(xì)胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度，防止水分滲入角膜內(nèi)，維持角膜實質(zhì)層相對脫水狀態(tài)，維持透明性。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品：
家貓肺細(xì)胞;FCA-L2 肝細(xì)胞，QSG-7701細(xì)胞 BC3H1細(xì)胞，小鼠腦瘤細(xì)胞 | Ankyrin erythroid： 紅細(xì)胞蛋白Ank1抗體 0.2ml |
Anti-V5 tag V5 tag標(biāo)簽抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | Rhesus antibody Rh ABHD15 水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Caspase-12(hunman)/FITC 熒光素標(biāo)記半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體(人)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFN gamma(F2E4) γ-干擾素單克隆抗體 規(guī)格 0.1ml |
ARIP2B(Activin receptor 2B) 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體 0.5mg | HRG1： 調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.1ml |
sIgA/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM164B FAM164B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
人胚腎細(xì)胞;2V6.11 | Kyse510 人食管癌細(xì)胞 |
CL-0394NCI-H2170(人肺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | MN-h, 小鼠海馬元 |
腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | NCI-H2452(人間皮瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0907 | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(彝族);HYL |
BJAB細(xì)胞，人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系 KM小鼠未分化膠質(zhì)瘤瘤株,B22細(xì)胞 人前列腺成纖維細(xì)胞裂解物HPrFL | 人角膜內(nèi)皮原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh IFN gamma(F2E4) γ-干擾素單克隆抗體 規(guī)格 0.1ml |
TGFB1 Protein Human 重組人 / 恒河猴 / 狗 TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白 | CD3D & CD3E Others Human 人 CD3D & CD3E Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CL-0046C4-2(人前列腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 支氣管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
Hepa 1-6, 小鼠肝癌細(xì)胞 | Rhesus antibody Rh IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml |
PI ELISA Kit 大鼠胰島素 96T | 細(xì)胞名稱 種屬 |
CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule) 活化白細(xì)胞粘附分子抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | GHRP(Human Growth Hormone Releasing Peptide) ELISA Kit 人生長激素釋放多肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MEOX 2： 間充質(zhì)同源盒蛋白2抗體 0.2ml | 人胚腎細(xì)胞;2V6.11 |
化工儀器網(wǎng)