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大鼠主動脈平滑肌細胞培養(yǎng)實驗
閱讀：190 發(fā)布時間：2018-12-12實驗方法原理 運用組織塊貼壁法進行SD大鼠胸主動脈平滑肌細胞培養(yǎng)，并用倒置相差顯微鏡觀察、HE染色后形態(tài)學(xué)觀察以及用免疫組化對培養(yǎng)細胞進行鑒定。
實驗材料 SD大鼠
試劑、試劑盒 PBSFBSDMEM
儀器、耗材 手術(shù)剪手術(shù)鉗眼科剪刀眼科鑷子大頭針手術(shù)刀培養(yǎng)皿
實驗步驟
一、實驗步驟
1. SD 大鼠(150-200 g)，斷頭，浸入75%的酒精中15 min。
2. 置入超凈臺中，將大鼠固定于殺鼠板上，在無菌條件下打開腹腔，分離出胸主動脈、腹主動脈， 摘出。
3. PBS 清洗3 遍，剝?nèi)ネ饽?，用手術(shù)刀片刮去內(nèi)膜，留下中膜并將其移入1 mL 的培基中、剪成1×1 mm2 大小組織塊。
4. 再將PBS清洗組織塊，移入25 mL 的培養(yǎng)瓶中，用尖嘴彎管均勻貼好組織塊，放入37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)6 小時后，待組織塊貼壁后，再加入2.5 mL 培養(yǎng)液后放回培養(yǎng)箱中。
5. 隨后每3 天予以全量換液。
二、結(jié)果
3-5 天后可見組織塊周圍有細胞爬出，大約2 周后80－90%融合。
收起
注意事項
第四步中后加入2 mL 培養(yǎng)液時應(yīng)使其順無組織塊的皿邊緣緩慢流下，勿使組織塊吹下。