電泳儀的操作步驟中，處理樣品時(shí)有哪些注意事項(xiàng)？

樣品的收集與保存

• 保持生物活性：如果樣品是生物組織或細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子，在收集過程中要盡量保持其生物活性，避免使用過熱、過酸、過堿等可能導(dǎo)致生物大分子變性的條件。例如，在提取蛋白質(zhì)時(shí)，要在低溫環(huán)境下進(jìn)行，并加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白質(zhì)被降解。

• 防止核酸酶污染：對(duì)于核酸樣品，要特別注意防止核酸酶的污染，因?yàn)楹怂崦笗?huì)降解核酸。所有用于核酸處理的試劑和器材都要經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌處理，并且要避免樣品與手指等可能帶有核酸酶的物體接觸。

• 合適的保存條件：收集到的樣品若不能立即進(jìn)行電泳分析，需要根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇合適的保存條件。一般來說，蛋白質(zhì)樣品可以在 - 20℃或 - 80℃下冷凍保存，但要注意避免反復(fù)凍融，以免蛋白質(zhì)變性；核酸樣品則可以在 - 20℃保存，對(duì)于長(zhǎng)期保存的 DNA 樣品，也可以加入適量的無水乙醇，在 - 80℃下保存。

樣品的溶解與稀釋

• 選擇合適的溶劑：根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇合適的溶劑來溶解樣品。對(duì)于蛋白質(zhì)樣品，常用的溶劑有 Tris - HCl 緩沖液、PBS 緩沖液等，并且要根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)調(diào)整緩沖液的 pH 值，使蛋白質(zhì)能夠充分溶解并帶上適當(dāng)?shù)碾姾伞?duì)于核酸樣品，一般使用 TE 緩沖液（Tris - EDTA 緩沖液）來溶解，EDTA 的作用是螯合金屬離子，防止核酸酶對(duì)核酸的降解。

• 控制濃度：樣品的濃度要適中，過濃的樣品可能導(dǎo)致電泳條帶拖尾、變形或分辨率降低，過稀的樣品則可能無法檢測(cè)到清晰的條帶。在進(jìn)行電泳之前，需要通過定量分析方法（如蛋白質(zhì)定量的 Bradford 法、BCA 法，核酸定量的紫外分光光度法等）準(zhǔn)確測(cè)定樣品的濃度，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尅?/p>

加入緩沖液和添加劑

• 緩沖液的選擇：加入的緩沖液要與電泳緩沖液相匹配，以保證在電泳過程中樣品所處的環(huán)境 pH 值穩(wěn)定。不同的電泳體系需要使用不同的緩沖液，如 SDS - PAGE 電泳常用 Tris - 甘氨酸緩沖液，而等電聚焦電泳則需要使用專門的兩性電解質(zhì)緩沖液。

• 添加劑的使用：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，可能需要在樣品中加入一些添加劑。例如，在蛋白質(zhì) SDS - PAGE 電泳中，需要加入十二烷基硫酸鈉（SDS）和 β - 巰基乙醇等。SDS 可以使蛋白質(zhì)變性并帶上負(fù)電荷，β - 巰基乙醇則可以還原蛋白質(zhì)中的二硫鍵，使蛋白質(zhì)亞基充分分離。在核酸電泳中，有時(shí)會(huì)加入溴化乙錠（EB）等染料，以便在電泳后能夠通過紫外光照射觀察核酸條帶，但要注意 EB 是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)，使用時(shí)需小心操作并做好防護(hù)。

混合與離心

• 充分混合：加入緩沖液和添加劑后，要充分混合樣品，使樣品中的成分均勻分布?？梢允褂脺u旋振蕩器或移液器反復(fù)吹打等方法進(jìn)行混合，但要注意避免產(chǎn)生過多的氣泡，以免影響后續(xù)的加樣操作。

• 離心處理：混合后的樣品一般需要進(jìn)行離心處理，以去除可能存在的不溶性雜質(zhì)或氣泡。離心速度和時(shí)間根據(jù)樣品的性質(zhì)和體積而定，一般蛋白質(zhì)樣品可以在 10000 - 15000rpm 下離心 5 - 10 分鐘，核酸樣品則可以在較低的速度下（如 5000 - 8000rpm）離心 3 - 5 分鐘。離心后的樣品取上清液用于電泳加樣