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            一級菌種培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)!

            閱讀:1313        發(fā)布時(shí)間:2019/9/6
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             一級菌種培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)!
            一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>
            1.了解一級菌種培養(yǎng)基配制的原則;
            2.掌握一級菌種培養(yǎng)基配制的工藝流程;
            3.學(xué)會一級菌種培養(yǎng)基配制的具體方法步驟;
            4.學(xué)會棉塞的制作方法和手提式高壓蒸汽鍋的使用方法。
            二、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、工具和材料
            手提式高壓鍋、1000~1500W電爐、感量1/10g的粗天平、1000mL量杯、玻璃漏斗、漏斗架各一個(gè),8~10cm長乳膠管一根,止流夾一個(gè),20mm×200mm試管150支左右,鐵絲筒兩個(gè),小刀和剪子一把,普通棉花250g,牛皮紙、馬鈴薯、瓊脂和葡萄糖或蔗糖適量。
            三、實(shí)驗(yàn)步驟
            (1)取適量馬鈴薯,削去皮,挖去芽眼。稱取200g,切成薄片或小塊,用清水淘洗之后,放入鍋內(nèi),加水1200mL,用文火煮沸20~30min,用四層紗布過濾,取濾液1000mL,如不足加水補(bǔ)足1000mL。
            (2)稱取瓊脂20g,洗凈剪碎,加入馬鈴薯煮出液中,用文火加熱,邊煮邊攪拌,直至全部瓊脂融化,再用四層紗布過濾,并用熱水補(bǔ)足1000mL,加入預(yù)先溶解的葡萄糖水,攪拌之后煮2min后?;?。
            (3)分裝試管。根據(jù)要求,用1%鹽酸或1%氫氧化鈉溶液調(diào)整酸堿度后,將培養(yǎng)基趁熱分裝在試管中。
            先在玻璃漏斗嘴上套一段長8~10cm的乳膠管,卡上止流夾,將培養(yǎng)基倒入漏斗中(其余培養(yǎng)基要置電爐上保溫)。左手握住3~5支試管,讓乳膠管伸入試管中部,右手拇指和食指按下止流夾,逐一注入培養(yǎng)基,裝入量以試管長度的1/5~1/4為宜。分裝時(shí)不要讓培養(yǎng)基沾在試管口上,若已沾上,要用干凈紗布擦干凈。
            (4)塞棉塞。培養(yǎng)基分裝試管后,要塞上棉塞。
            制作棉塞的方法很多,這里介紹一種常用的方法。取適量棉片,在桌上鋪成長12~15cm,寬12cm左右的薄棉墊,先將棉墊下部1/3向上折疊,再將上部1/3向下折疊,然后將長棉墊逆時(shí)針方向轉(zhuǎn)90°,讓光滑的一邊向左用右手持棉墊并用拇指按住,左手拇指和食指向外旋卷,并將參差不齊的棉纖維纏住呈一圓柱形。用右手按順時(shí)針方向?qū)⒚奕M(jìn)管口內(nèi),塞入部分為棉塞長度的2/3。
            (5)捆扎試管。塞好棉塞之后,應(yīng)將試管捆成束,并用牛皮紙將棉塞部分包扎好,裝進(jìn)高壓鍋內(nèi)滅菌。
            (6)滅菌。用手提式高壓蒸汽滅菌鍋滅菌。其步驟如下。
            ①加水。先向鍋內(nèi)加水,略超過支架。
            ②裝鍋。將包扎好的試管直立放在內(nèi)筒中,不要裝得過緊、過滿。
            ③關(guān)嚴(yán)鍋蓋。先將軟管對好內(nèi)筒插孔,蓋嚴(yán)鍋蓋,對角旋緊旋鈕。
            ④加熱。插上電爐插頭或推上電閘加熱。
            ⑤排放冷空氣。開始加熱時(shí)將放氣閥打開,待看到有大量蒸汽排出后關(guān)上放氣閥。
            ⑥升壓保壓。排放冷空氣之后,繼續(xù)加熱,當(dāng)壓力表指針達(dá)到0.11MPa時(shí),開始計(jì)時(shí),維持30min。
            ⑦降壓排氣。維持30min之后,拔下電源插頭或拉開電閘,使其自然冷卻,或從電爐上把鍋提下來,待壓力表指針降到零時(shí),打開放氣閥,排放蒸汽。
            ⑧出鍋。排完氣后,松開旋鈕,將鍋蓋揭開一小縫,待培養(yǎng)基溫度降至60℃左右時(shí),取出試管。
            ⑨擺斜面。試管從鍋內(nèi)取出后,要將試管一支一支地散放在桌面上的小木條上,使之冷卻成斜面。斜面長度為試管長度的2/3。
            (7)空白實(shí)驗(yàn)。將滅菌后的斜面試管,各組隨機(jī)抽取幾支,放在28~32℃溫箱中空白培養(yǎng)48~72h,如無任何雜菌生長,說明滅菌*,才可使用。

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