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 轉(zhuǎn)化細(xì)胞這些研究闡明了自噬的新功能, 開辟了新的研究方向, 也給了我們將自噬運(yùn)用于低溫脅迫研究的靈感。本文對(duì)自噬的特異基因LC3進(jìn)行標(biāo)記, 通過檢測(cè)自噬小體*的LC3II自噬熒光點(diǎn)監(jiān)測(cè)自噬出現(xiàn)的時(shí)間與強(qiáng)度。隨后, 將HeLa細(xì)胞放置于不同溫度的低溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng), 模擬自然界中的急性冷刺激。

在這種急性冷刺激下, HeLa細(xì)胞出現(xiàn)了不同程度的自噬熒光點(diǎn)聚集, 證實(shí)了低溫可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生自噬, 且溫度越低, 出現(xiàn)自噬的時(shí)間越早, 出現(xiàn)的自噬程度越強(qiáng)。結(jié)合細(xì)胞低溫下的存活率結(jié)果, 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬狀態(tài)與細(xì)胞存活狀態(tài)之間密切相關(guān), 在低溫脅迫下, 細(xì)胞先啟動(dòng)自噬, 當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的自噬慢慢減弱并開始消失時(shí), 細(xì)胞開始出現(xiàn)死亡。

為了確定在低溫脅迫下, 細(xì)胞內(nèi)自噬所擔(dān)當(dāng)?shù)慕巧? 使用 Bafilomycin A1阻斷了轉(zhuǎn)化細(xì)胞自噬。自噬阻斷后, 低溫脅迫下的細(xì)胞提前開始死亡, 且細(xì)胞的存活率較未阻斷的細(xì)胞出現(xiàn)顯著性下調(diào)。這證明了細(xì)胞受到急性冷刺激時(shí), 自噬可以保護(hù)細(xì)胞, 維持細(xì)胞的存活, 而這種保護(hù)開始減弱時(shí), 細(xì)胞便開始死亡。

為了深入了解低溫下自噬保護(hù)細(xì)胞的可能機(jī)制, 根據(jù)文獻(xiàn)資料, 測(cè)定了細(xì)胞內(nèi)的ROS。在低溫下, 細(xì)胞內(nèi)的ROS出現(xiàn)顯著上調(diào), Bafilomycin A1阻斷了細(xì)胞內(nèi)的自噬后, 細(xì)胞內(nèi)的ROS處于更高的水平。這些結(jié)果說明, 細(xì)胞在受到急性冷刺激后, 通過自噬來清除受損的線粒體, 進(jìn)而影響細(xì)胞內(nèi)的ROS 水平。而低溫誘導(dǎo)的自噬對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響可能參與了對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用, 其細(xì)節(jié)仍有待進(jìn)一步研究。
4,7-Dimethyl-1,10-phenanthroline    CAS號(hào)：    3248-05-3    質(zhì)量規(guī)格：    4,7-二甲基-1,10-鄰二氮雜菲(>98.0%(T))    英文名稱：    >98.0%(T)        
4-[(4-Methoxybenzylidene)amino]benzonitrile    CAS號(hào)：    13036-19-6    質(zhì)量規(guī)格：    4-[(4-甲氧基苯亞甲基)氨基]氰苯(>98.0%(T))    英文名稱：    >98.0%(T)        
4-[(4-Methoxybenzylidene)amino]cinnamic Acid    CAS號(hào)：    25959-50-6    質(zhì)量規(guī)格：    4-[(4-甲氧基苯亞甲基)氨基]肉桂酸(>98.0%(T))    英文名稱：    >98.0%(T)        
4-[(tert-Butoxycarbonylamino)methyl]pyridine-2-carboxylic Acid    CAS號(hào)：    260970-57-8    質(zhì)量規(guī)格：    4-[(叔丁氧羰氨基)甲基]吡啶-2-羧酸(>96.0%(HPLC)(T))    英文名稱：    >96.0%(HPLC)(T)        
4-[2-(5-Ethyl-2-pyridinyl)ethoxy]benzenepropanoic Acid Ethyl Ester(Pioglitazone Impurity)    CAS號(hào)：    868754-42-1    質(zhì)量規(guī)格：    4-[2-(5-乙基-2-吡啶基)乙氧基]benzenepropanoic acide 乙酯(匹格列酮雜質(zhì))    英文名稱：    美國進(jìn)口        
4-[3-(Methylamino)-1-(2-thienyl)propyl]-1-naphthalenol Hydrobromide (Duloxetine Impurity)    CAS號(hào)：    949096-01-9    質(zhì)量規(guī)格：    4-[3-(甲氨基)-1-(2-噻吩基)丙基]-1-萘酚氫溴酸鹽 (度洛西汀雜質(zhì))    英文名稱：    美國進(jìn)口        
4-Acetamido-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-Oxyl Free Radical     CAS號(hào)：    14691-89-5    質(zhì)量規(guī)格：    4-乙酰氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>98.0%(GC))    英文名稱：    >98.0%(GC)        
4-Acetaminophen Sulfate Potassium Salt    CAS號(hào)：    32113-41-0    質(zhì)量規(guī)格：    4-對(duì)乙酰氨基酚硫酸鉀鹽    英文名稱：    美國進(jìn)口  
轉(zhuǎn)化細(xì)胞