狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

影響人正常組織來源細胞轉(zhuǎn)染效率因素主要有三個，細胞種類（狀態(tài)）、質(zhì)粒以及轉(zhuǎn)染試劑。為了得到一個好的轉(zhuǎn)染結(jié)果，我們要像下面這樣做。
轉(zhuǎn)染前
1、轉(zhuǎn)染前細胞的狀態(tài)和密度都非常影響轉(zhuǎn)染效率和后期的實驗結(jié)果。轉(zhuǎn)染時細胞的密度為50%-80%較好，同時注意在轉(zhuǎn)染后收細胞時的密度不要過高。
比如轉(zhuǎn)染質(zhì)粒到細胞內(nèi)，48小時后做WB，那么此時細胞的密度不要長滿. 因為細胞長的過高嚴重影響細胞的狀態(tài)（周期進程阻滯，凋亡增加等）從而影響實驗結(jié)果。一般為前一天下午鋪板，第二天上午進行轉(zhuǎn)染，48小時后收細胞進行功能檢測。
2、不同的質(zhì)粒和脂質(zhì)體*搭配比例不同，轉(zhuǎn)染前，應(yīng)該摸一個*配比?？梢园凑召|(zhì)粒：脂質(zhì)體=1：1， 1：1.5， 1：2， 1：2.5， 1：3， 1：3.5的梯度比例來檢測*轉(zhuǎn)染比例。
3、支原體污染會嚴重影響細胞轉(zhuǎn)染的效率，且支原體污染不會像細菌污染那么明顯可見，轉(zhuǎn)染前可以用環(huán)丙沙星殺一殺支原體。
轉(zhuǎn)染時
轉(zhuǎn)染時
1、轉(zhuǎn)染時，要小心輕柔的將lipo2000加到培養(yǎng)基中并輕輕混勻（說明書上的用詞為：Mix gently），避免粗暴用力吹打，會導致脂質(zhì)體失效。

2、轉(zhuǎn)染時各種培養(yǎng)皿添加的質(zhì)粒和脂質(zhì)體參考量對查看相對應(yīng)的表！
轉(zhuǎn)染后
1、現(xiàn)在大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑可以使用帶血清的培養(yǎng)基進行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后6小時更換培養(yǎng)基，一是lipo2000具有一定毒性，二是培養(yǎng)基需要更換成有血清培養(yǎng)基。
2、轉(zhuǎn)染后效率的檢測：
（1）觀察轉(zhuǎn)染后細胞熒光情況
（2）qPCR驗證。
（3）WB檢測敲減或者過表達蛋白。
3、人正常組織來源細胞轉(zhuǎn)染后發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率不高，可以通過兩種方法：
（1）復(fù)轉(zhuǎn)染，即轉(zhuǎn)染后12-24小時再次進行轉(zhuǎn)染，前提是該細胞對脂質(zhì)體的耐受性較好，轉(zhuǎn)染后細胞死亡數(shù)較少。
（2）通過藥篩來殺死未轉(zhuǎn)入成功的細胞。前提是該質(zhì)粒帶有抗生素抗性的基因。
Lumefantrine     苯芴醇標準品    82186-77-4     100mg
Bismuth Citrate    枸櫞酸鉍標準品    813-93-4    100mg
Clarithromycin    克拉霉素標準品    81103-11-9    100mg
Fluticasone Propionate     氟替卡松丙酸酯標準品    80474-14-2     100mg
Sertraline Hydrochloride     鹽酸舍曲林標準品    79559-97-0     100mg
Mebrofenin    甲溴菲寧標準品    78266-06-5     100mg
    碘海醇相關(guān)物質(zhì)C標準品    76820-34-3     100mg
Terfenadine Related Compound A    特非那定相關(guān)物質(zhì)A標準品    76815-60-6     100mg
Docusate Potassium    " 
1,2-二(2-乙基己基氧碳基)乙烷磺酸鉀標準品 7491-09-0    100mg
人正常組織來源細胞