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            甲型肝炎疫苗血清?制備方法

            閱讀:404          發(fā)布時(shí)間:2021-7-15

            甲型肝炎疫苗血清制備方法:

            此法用于制備間接法抗抗體。因抗原為可溶性,故多需加佐劑。

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            (1)淋巴結(jié)注射法

            1)選擇體重2~3Kg的健康雄性家兔( 2只以上),編號;

            2)在家兔兩后腳掌共注射活卡介苗,50mg(約0.6mL.每只足庶部皮下0.1mL,皮內(nèi)0.2mL)。7~10d后,鼠或國窩處淋巴結(jié)腫大如黃豆或蠶豆大??;

            3)用二指固定腫大之淋巴結(jié),兩側(cè)淋巴結(jié)各注射加有*佐劑的抗原o.5mL,共1mL。事先將抗原稀釋為 5~10mg/ml,在免疫前一日加入青、鏈霉素,使青、鏈霉素的濃度分別為1000U/mL和1000mg/mL。4℃,次日取出與佐劑混合成乳劑。許多單位用兩個(gè)注射器分別吸取佐劑與抗原,中間用細(xì)膠管連接,相互推進(jìn)若干次,達(dá)到乳化目的;

            4)10~14d后,于兩側(cè)淋巴結(jié)各注射加有*佐劑的抗原0.25~0.5mL(這一次也可以省略);

            5)7d后,于兩側(cè)淋巴結(jié)各注射加有不*佐劑的抗原0.25~0.5mL;

            6)試血:第三次免疫后7~10d,耳靜脈取少量血,分離血清,用雙擴(kuò)散法,中間孔加抗原(1mg/mL),周圍孔加不同稀釋度的待檢抗血清,37℃、 24h,觀察結(jié)果,效價(jià)在1︰16以上,或者中間孔加抗血清,周圍孔加不同稀釋倍數(shù)的抗原。效價(jià)達(dá)4000倍以上即可應(yīng)用;

            7)放血:效價(jià)合格后即可放血。放血前停食12h。動(dòng)物仰臥固定,頸部剪毛消毒,切開皮膚lOcm,找到頸動(dòng)脈,將頸動(dòng)脈和迷走神經(jīng)剝離。選擇血管中段,用兩止血鉗夾?。s 5cm),切開,放血(2500g重家兔可放血lOOmL);

            8)分離血清:血液放于大試管、平皿或三角瓶中,凝固后,用鉑耳或無菌滴管沿邊緣剝離,先故37122h,再放4℃,使血清充分析出。離心沉淀,鑒定合格,冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

            RA, 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

            RLF, 大鼠淋巴成纖維細(xì)胞

            rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞

            rCSC, 大鼠心肌細(xì)胞

            RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞

            RLFs, 大鼠肺成纖維細(xì)胞

            rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞

             細(xì)胞名稱

            MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元

            MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元

            mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞

            MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

            MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞

            mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞

            CSC, 小鼠心肌細(xì)胞

            小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)

            MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

            MM, 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞

            mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞


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