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            小鼠胰島素ELISA試劑盒具體操作步驟有哪些

            閱讀:367          發(fā)布時間:2019-8-28

            小鼠胰島素ELISA試劑盒操作步驟
            1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
            800pg/ml
            5號標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            400pg/ml
            4號標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            200pg/ml
            3號標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            100pg/ml
            2號標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            50pg/ml
            1號標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

            3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

            4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
            6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

            7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

            8. 溫育:操作同3。
            9. 洗滌:操作同5。

            10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

            11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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