脂質是一類廣泛存在于生物體中的有機分子，它們在細胞的結構和功能中扮演著重要角色。脂滴和膽固醇是脂質的不同形式，它們在結構和功能上有所不同。脂滴是中性脂的主要貯存場所，包括脂酰甘油和酯化膽固醇。在病理情況下，如器官發(fā)生脂肪變性，細胞內可能出現(xiàn)脂滴增多，通過脂肪染色能將這些脂滴清晰的顯現(xiàn)出來。膽固醇是真核細胞細胞膜的重要成分，能夠維持膜結構完整性，調節(jié)膜流動性，參與信號轉導，在動脈硬化、Ｃ型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C, NPC)、阿爾茨海默病等疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。
脂滴和膽固醇的染色是病理學和細胞生物學研究中的重要技術，用于觀察和量化細胞內脂質的積累。目前，脂滴染色使用zui廣泛的染料包括油紅O(Oil Red O)、尼羅紅(Nile Red)、蘇丹染料(Sudan Dyes)等。膽固醇染色使用最多的染料是菲律平(Filipin III)，Filipin已被廣泛應用30余年。它可用于標記生物膜結構上及非細胞結構內的自由膽固醇，也能配合應用膽固醇酯化酶，使膽固醇酯水解成自由膽固醇而間接顯色。
接下來，小愛就給大家詳細介紹脂滴和膽固醇的染色方法。
一、脂滴染色
1、組織切片脂滴油紅O(abs42024259)染色
1）實驗原理
油紅O屬于偶氮染料，是很強的脂溶劑和染脂劑，與甘油三酯結合呈小脂滴狀。脂溶性染料能溶于組織和細胞中的脂類，它在脂類中的溶解度比在溶劑中大。當組織切片置入染液時，染料則離開染液而溶于組織內的脂質（如脂滴）中，使組織內的脂滴呈橘紅色。
2）染色步驟[1]
① 油紅O染色液配制：
a.母液準備：稱取1g油紅O，加入100mL異內醇配置成儲存液，棕色瓶4℃密封保存。
b.工作液準備：使用前加雙蒸水稀釋至60%，濾紙過濾后使用。
② 用冰凍切片機切取5μm厚的肝組織切片；
③ 用95%乙醇固定，蒸餾水清洗1min，60%異丙醇浸泡30min；
④ 再用60%油紅O染色溶液處理10min和15min，蒸餾水沖洗1min；
⑤ 蘇木素復染，用自來水清洗1~3min，光鏡下觀察肝細胞脂質沉積情況。
3）肝組織油紅O染色結果圖：
（注：圖片來源于文獻[1]）
2、細胞脂滴尼羅紅(abs9114)染色（以下染色方法僅供參考）
1）實驗原理
尼羅紅是一種親脂性熒光染色劑，它是一類環(huán)境敏感性熒光染料，能夠在富含脂質的環(huán)境中產(chǎn)生強烈的熒光，而在水性介質中的熒光強度極小，這種特性使得它成為了一款極重要檢測細胞內脂滴的熒光指示劑，可以通過熒光顯微鏡和流式細胞檢測結果。
2）染色步驟
① 尼羅紅染色液配制：
a.母液準備：取適量的尼羅紅（Mw：318.37g/mol）用無水DMSO充分溶解制備1mM儲存液，按照單次用量分裝凍存，避免反復凍融，避光保存。
b.工作液準備：用HHBS或生理緩沖液(pH 7.0)將母液按1:1000稀釋為1×尼羅紅工作液，漩渦混勻。
【注意】：
尼羅紅的實際染色濃度請參考文獻或實驗室體系來調整。以上只做參考。
② 用檢測化合物處理細胞一段時間；
③ 離心并調整細胞濃度為1-5×105cell/管；
④ 用500µL尼羅紅工作液重懸細胞；
⑤ 室溫或37oC避光孵育5-10min；
⑥ 吸掉染色工作液，用HHBS或適當緩沖液清洗細胞；
⑦ 用500µL預熱的HHBS或培養(yǎng)基重懸細胞，使細胞密度為1-5×105cell/管；
⑧ 熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測熒光信號，Ex/Em=552/636nm。
【注意】：
① 對于貼壁細胞，可用HHBS或適當緩沖液清洗細胞，然后直接加入尼羅紅工作液孵育；
② 細胞也可預固定，然后用尼羅紅工作液染色。
二、膽固醇染色
細胞膽固醇菲律平(Filipin III, abs42018484)染色
1）實驗原理
菲律平的主要成分是Filipin III，它可以特異性地與游離膽固醇相互作用，而不與酯化的膽固醇結合。這種特異性結合是由于菲律平分子結構中包含多個共軛雙鍵，使其能夠與膽固醇分子的疏水部分形成復合物。當Filipin III與游離膽固醇結合后，其激發(fā)光譜波峰約在360nm處，發(fā)射光譜波峰約在480nm處。通過檢測這些特定波長附近的熒光信號，可以表征細胞內的膽固醇含量。
2）染色步驟[2]
① 菲律平染色液配制：
a.母液準備：1mg菲律平粉末中加入1mL DMSO，完quan溶解配置成1mg/mL儲存液，按照單次用量分裝凍存，避免反復凍融，避光保存。
b.工作液準備：使用前，取適量母液加入到PBS中，稀釋成一定濃度的工作液（如0.1mg/mL）備用。
② 將細胞接種于蓋玻片中，培養(yǎng)12-18h；
③ 用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次后，在室溫下用4%多聚甲醛固定20min；
④ 室溫下用0.1mg/mL菲律平III處理細胞30min；
⑤ 細胞再用0.35μg/mL碘化丙啶(PI)染色5min；
⑥ 最后，用共聚焦激光掃描顯微鏡在405nm處檢測菲律平和PI染色的熒光強度。
3）星形膠質細胞/神經(jīng)元細胞菲律平染色結果圖
（注：圖片來源于文獻[2]）
愛必信（上海）生物科技有限公司可為科研人員提供非常全面的細胞結構（如細胞膜、細胞質、細胞核、細胞骨架、線粒體、溶酶體、外泌體、內質網(wǎng)等）染色相關染料。關于脂質染色，小愛今天就介紹到這里。下期小愛將為大家介紹外泌體的標記技術，感興趣的老師記得關注我們呦！
參考文獻
[1] Ji X, Ma Q, Wang X, et al. Digeda-4 decoction and its disassembled prescriptions improve dyslipidemia and apoptosis by regulating AMPK/SIRT1 pathway on tyloxapol-induced nonalcoholic fatty liver disease in mice[J]. J Ethnopharmacol. 2023;317:116827.
[2] Huang Y, Zhang W, Guo X, et al. Cellular cholesterol loss by DHCR24 knockdown leads to Aβ production by changing APP intracellular localization[J]. J Lipid Res. 2023;64(5):100367.
脂質染色產(chǎn)品推薦：
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | λEx/λEm (nm) | 產(chǎn)品描述 |
abs42018484 | 菲律平 | 360/480 | 測定未酯化膽固醇水平。 |
abs42024259 | 油紅O | 628/684 | 細胞脂滴染色；組織切片脂質染色。 |
abs42027851 | 蘇丹Ⅳ | 255/355 | 對組織切片脂類、甘油三酯、脂蛋白染色。 |
abs9114 | 尼羅紅 | 552/636 | 測定細胞內的脂肪滴。 |
abs9214 | 蘇木素染液 | — | 組織學中用于細胞核的染色。 |
abs9358 | PI染色液(紅色) | 535/617 | 細胞核染色，膽固醇染色中常與菲律平搭配使用。 |
熒光染料產(chǎn)品推薦：
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | λEx/λEm (nm) | 產(chǎn)品描述 |
abs45153674 | DiO 高氯酸鹽(綠色) | 484/501 | 活細胞示蹤、細胞膜染色 |
abs47048165 | DiD 對氯苯磺酸鹽(紅色) | 644/663 | 活細胞示蹤、細胞膜染色 |
abs80001 | 霍亂毒素B亞單位(CTB) | — | 神經(jīng)示蹤劑 |
abs80003 | 霍亂毒素B亞單位-FITC | 494/520 | 神經(jīng)示蹤劑 |
abs45153692 | DiR 碘化物(深紅色) | 748/780 | 動物活體成像 |
abs42075819 | D-熒光素鉀鹽 | — | 動物活體成像 |
abs47048270 | 羅丹明標記鬼筆環(huán)肽(橙紅) | 540/565 | 細胞骨架染色(F-action) |
abs47048271 | 鬼筆環(huán)肽-Fluor 488(綠色) | 493/517 | 細胞骨架染色(F-action) |
abs47048272 | 鬼筆環(huán)肽-Fluor 555(橙紅) | 556/574 | 細胞骨架染色(F-action) |
abs47014944 | 鈣黃綠素紅(紅色) | 560/574 | 細胞質染色 |
abs9106 | CFSE(綠色) | 492/517 | 細胞質染色 |
abs42006041 | DASPEI | 550/573 | 線粒體染色 |
abs9103 | JC-1 | 585/590 | 線粒體膜電位檢測 |
abs47038870 | 溶酶體綠色熒光探針 | 504/511 | 溶酶體染色 |
abs47038871 | 溶酶體紅色熒光探針 | 577/590 | 溶酶體染色 |
abs9819 | PKH26紅色熒光細胞連接試劑盒 | 551/567 | 外泌體染色 |
abs9820 | PKH67綠色熒光細胞連接試劑盒 | 490/502 | 外泌體染色 |
abs47038874 | 內質網(wǎng)綠色熒光探針 | 489/520 | 內質網(wǎng)染色 |
abs47038875 | 內質網(wǎng)紅色熒光探針 | 587/615 | 內質網(wǎng)染色 |
abs47047616 | DAPI染色液(藍色) | 364/454 | 細胞核染色 |
abs813337 | Hoechst 33342(藍色) | 350/461 | 細胞核染色 |
abs9104 | 7-AAD(紅色) | 545/650 | 細胞核染色 |
abs9358 | PI染色液(紅色) | 535/617 | 細胞核染色 |
abs45153639 | Fluo 3-AM | 506/526 | 鈣離子(Ca2+)探針 |
abs42197174 | DCFH-DA | 502/523 | 活性氧(ROS)探針 |
abs42016243 | DAF-2 DA | 491/513 | 一氧化氮(NO)探針 |
abs47044989 | WSP-1 | 465/515 | 硫化氫(H2S)探針 |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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