冰凍切片：
是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷，也是組織化學(xué)，特別是酶組織化學(xué)很常用的切片技術(shù)。
圖1 冷凍切片機(jī)
冰凍切片與石蠟切片對(duì)比：
| 石蠟切片 | 冷凍切片 |
步驟 | 需要經(jīng)過(guò)固定-脫水-透明-透蠟-包埋等多個(gè)步驟，相對(duì)比較繁瑣 | 只需固定-脫水-包埋，流程簡(jiǎn)便 |
組織結(jié)構(gòu) | 保存良好 | 切片易碎爛 |
抗原活性 | 經(jīng)過(guò)酒精、二甲苯等有機(jī)溶劑處理，組織內(nèi)抗原活性失去較多 | 免疫活性保存良好，尤其是細(xì)胞表面抗原 |
抗原修復(fù) | 一定要做 | 可以不做 |
抗原定位 | 準(zhǔn)確 | 冰晶容易影響抗原定位 |
連續(xù)切片 | 可以 | 較難獲取 |
包埋 | 石蠟包埋 | OCT包埋 |
抗體洗脫（多色） | 熱修復(fù)和抗體洗脫液均可 | 抗體洗脫液 |
保存時(shí)間 | 蠟塊能保存1-3年，切片3個(gè)月 | -80℃保存數(shù)月 |
切片厚度 | 3-5um | 8um左右 |
運(yùn)輸 | 常溫 | 干冰 |
OCT包埋劑的應(yīng)用：
與石蠟組織相比，冷凍切片的簡(jiǎn)便快捷使其在臨床組織學(xué)診斷中應(yīng)用廣泛，特別適用于脂肪組織、神經(jīng)組織、髓鞘，以及肌肉的活檢染色。
OCT包埋劑是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，其用途是在冰凍切片時(shí)支撐組織，以增加組織的連續(xù)性，減少皺折及碎裂。OCT混合物為水溶性，故在漂片時(shí)可溶于水，在后續(xù)的染色中不會(huì)增加背景染色。愛必信的OCT包埋劑六折，質(zhì)量媲美櫻花，包埋效果被許多客戶肯定！
圖2 abs9756-110mL OCT包埋劑
冰凍切片樣本制備：
冰凍切片的樣本制備較為簡(jiǎn)單。
方式一：盡量選用新鮮組織，用生理鹽水清洗掉表面血水，將組織修剪到一定大小，用吸水紙吸干表面水分（防止水分在速凍過(guò)程中形成冰晶），直接進(jìn)行后續(xù)包埋。
方式二：選取新鮮組織，修整到一定大小，至于多聚甲醛中低溫固定18-24h，再經(jīng)過(guò)30%的蔗糖沉降脫水（或者梯度脫水，15%蔗糖中脫水至沉底，再轉(zhuǎn)到30%蔗糖中沉底），再經(jīng)過(guò)OCT的包埋。
包埋：提前準(zhǔn)備泡沫箱，倒入一定量的液氮，在包埋磨具中加入少量OCT覆蓋磨具底部（避免產(chǎn)生氣泡，若產(chǎn)生氣泡可用注射器或者槍頭吸棄），將組織至于OCT包埋劑中，調(diào)整組織位置，加入OCT包埋劑全面覆蓋組織（避免產(chǎn)生氣泡），用鑷子夾住磨具，至于液氮上方，大概10-20s后，組織就會(huì)迅速的冰結(jié)成塊，若不能及時(shí)切片，用錫紙包裹，做好標(biāo)記，至于-80℃冰箱內(nèi)保存。
圖3 冰凍切片一次性包埋磨具
許多老師糾結(jié)于方案一和方案二的選擇，這里給到的建議是，如果是手術(shù)中的快速診斷，簡(jiǎn)單的HE染色，可以用方案一，結(jié)果快，但是在追求速度的同時(shí)，極大的降低了靈敏度，科研實(shí)驗(yàn)或者做多重?zé)晒饷庖呓M化，推薦使用方案二，為的是保證染色時(shí)能精確定位，提高特異度和靈敏度。
切片制作：
1、切片前調(diào)整冷凍切片機(jī)溫度在-25℃~-18℃；
2、在標(biāo)本拖上涂適量包埋劑，將冷凍包埋好的樣本取出，至于標(biāo)本拖上冷凍固定；
3、將樣本拖至于冷凍切片機(jī)的機(jī)頭上，調(diào)整位置；
4、調(diào)整切片厚度進(jìn)行修片（修片時(shí)厚度可以大一些），修整標(biāo)本至組織塊暴露。用毛筆將操作區(qū)清掃干凈；
5、重新調(diào)整切片厚度，進(jìn)行正式切片，切下的組織片在防卷板下方平鋪，可用毛筆輔助組織片平整，用防脫載玻片平穩(wěn)吸附切片。
注意事項(xiàng)：
1、操作時(shí)，玻璃機(jī)蓋不可打開過(guò)大，以免溫度變化；
2、載玻片吸附切片之前應(yīng)置于室溫，否則難以吸附；
3、樣本拖涂的包埋劑要盡量平整，不可一邊高一邊低，會(huì)影響切面位置。
圖4 愛必信組化試劑盒
冰凍切片常見問題及對(duì)策：
1、溫度對(duì)切片的影響
組織塊過(guò)冷切片時(shí)易碎裂或成粉末狀，溫度不足，組織回軟也不能保證切片的完整。
2、切片皺縮或卷縮
可能的原因有：刀片不夠鋒利、防卷板有異物、防卷板與刀片位置不協(xié)調(diào)他、包埋劑包埋不全。
3、切片脫落或吸附性差
可能的原因有：實(shí)驗(yàn)前防脫載玻片至于冷凍切片機(jī)內(nèi)，樣本中有壞死區(qū)域，切片過(guò)厚、載破片有異物。
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs957 | 即用型高效免疫組化二抗試劑盒 | 5mL |
abs996 | 即用型免疫組化二抗試劑盒（鼠兔通用型） | 5mL |
abs998 | 即用型免疫組化二抗試劑盒（抗兔） | 5mL |
abs997 | 即用型免疫組化二抗試劑盒（抗小鼠） | 5mL |
abs9756 | OCT包埋劑 | 110mL |
abs9179 | 4%多聚甲醛（通用型組織固定液） | 500mL |
abs929 | 免疫組化筆 | 1支 |
abs9785 | 免疫組化筆plus | 1支 |
abs9299 | 一抗二抗稀釋液 | 100mL |
abs9217 | 蘇木素-伊紅（HE）染色試劑盒 | 100mL |
Absin特色產(chǎn)品線：
WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動(dòng)劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
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