Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque ）是一種無(wú)菌的、即用型的Ficoll-泛影酸鈉，能夠簡(jiǎn)單快速的從少量或大量的人外周血、骨髓和臍帶血中高產(chǎn)和高純度的提純淋巴細(xì)胞的一種即用型密度梯度介質(zhì)。Ficoll-Paque PLUS內(nèi)毒素水平非常低，小于0.12EU/ML，分離所得的細(xì)胞中95%左右為單個(gè)核細(xì)胞，細(xì)胞存活率大于90%，回收率為60%左右。
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
| abs930a | Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque ） | 50ml |
| abs930b | Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque ） | 100ml |
# 操作 Protocol #
一.試劑準(zhǔn)備
1.樣本體積: 4 ml（總）
| 血液樣本（去纖維蛋白的或加抗凝劑處理） | 2ml | 混合 |
| 鹽緩沖液 | 2ml |
2.鹽緩沖液（可用PBS或生理鹽水）
A液配制
| Solution A | Conc.g/l | |
| Anhydrous D-glucose | 0.1 percent | 1.0 |
| CaCl2 * 2H2O | 5.0*10-5M | 0.0074 |
| MgCl2 * 6H2O | 9.8*10-4M | 0.1992 |
| KCl | 5.4*10-3M | 0.4026 |
| TRIS | 0.145M | 17.565 |
加950ml的蒸餾水溶解，用10 N HCl調(diào)節(jié)PH至7.6，zui后定容至1L。
B液配制
| Solution A | Conc.g/l | |
| NaCl | 0.14M | 8.19 |
1體積的鹽緩沖液：取1體積的A溶液與9體積的B容液混合，每次操作至少需要 20 ml /次
★每次實(shí)驗(yàn)需新鮮配置（可4℃保存一個(gè)星期）
二．分離步驟
1.使用前上下顛倒數(shù)次確保淋巴細(xì)胞分離液充分混合
2. 打開(kāi)瓶蓋，用移液管或注射器取淋巴細(xì)胞分離液 (4ml) 至離心管.
3. 取稀釋后的血液樣本（4ml）加入到離心管中 (Fig 1) V(血液：鹽緩沖液：淋巴細(xì)胞分離液)=1：1：2
.jpg)
注意：輕輕加入樣本形成分層，避免和淋巴細(xì)胞分離液混合
4.將離心管在18–20 °C，400g 離心 30-40 min
5. 輕輕移除上層分離液（血漿）
注：輕輕操作，避免淋巴細(xì)胞層和上層分離液混合
洗滌淋巴細(xì)胞以去除血小板操作步驟：
1. 吸取淋巴細(xì)胞層至干凈的離心管，盡量減少吸取上下分層液的量（淋巴細(xì)胞分離液層會(huì)引起粒細(xì)胞污染；血漿層會(huì)引起血小板和血漿蛋白的污染）
2. 向離心管中加入至少3體積（6ml）的鹽緩沖液
3. 使用巴斯德吸管輕輕吹打使淋巴細(xì)胞層與鹽緩沖液充分混合
4. 使離心管在18–20 °C在60–100 g 離心 10分鐘
5. 去除上層分離液
6. 再向離心管中添加6-8ml的鹽緩沖液，用巴斯德吸管輕輕吹打使淋巴細(xì)胞與其充分混合
7. 18–20 °C，60–100 g 離心 10 minutes
8. 去除上層分離液即可.
愛(ài)必信特色產(chǎn)品線：
生化試劑（60萬(wàn)種）、抗體（10萬(wàn)種）、細(xì)胞因子、二抗、ECL發(fā)光液、蛋白marker、激動(dòng)劑、抑制劑、凋亡試劑盒、BSA、動(dòng)植物提取物、蛋白酶K...
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