原代細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于一196~C液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。復蘇細胞時則直接將裝有細胞的凍存管投入40℃熱水中迅速解凍。
材料：凍存管，離心管，細胞培養(yǎng)用材料，500 mL燒杯，膠布，搪瓷杯，75%酒精棉。
藥品：培養(yǎng)基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清，0.25%胰蛋白酶溶液，二甲基亞砜(DMSO)或甘油，0.5%臺盼藍染液，液氮。
儀器：4℃冰箱，-70℃冰箱，液氮容器，微量加樣器，水浴鍋，離心機。
(一)細胞凍存
1.取待凍存的細胞用胰酶消化(見相關(guān)實驗細胞傳代培養(yǎng)部分)，用培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。800 r/min離心5 min，棄上清收集細胞。如果是懸浮生長的細胞，則可直接離心收集細胞。
2.加入適量凍存液(10%甘油+90%培養(yǎng)基，或者10%DMSO+90%培養(yǎng)基)制成細胞懸液。細胞濃度宜大，3×106個/mL左右，并可適量增加牛血清濃度至20%。
3.原代細胞懸液裝入凍存管中。用膠布封裹，做好標記(寫上細胞種類、時間及凍存條件等)。
4.凍存管在4℃下存放30 min，轉(zhuǎn)放-20℃ 1.5～2 h，再轉(zhuǎn)人-70℃ 4-12 h后即可轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(-196℃)，注意進行登記。
Imipenem Monohydrate     亞胺培南一水合物標準品    74431-23-5     100mg
    氯米芬相關(guān)雜質(zhì)A標準品    74056-26-1    100mg
Mupirocin Lithium     莫匹羅星鋰標準品    73346-79-9     100mg
Melatonin     褪黑素標準品    73-31-4     100mg
Apraclonidine Hydrochloride    鹽酸阿可樂定標準品    73218-79-8    100mg
Artemether    蒿甲醚標準品    71963-77-4    100mg
Cytosine    胞嘧啶標準品    71-30-7    100mg
Hypromellose Acetate Succinate     醋酸琥珀羥丙甲纖維素標準品    71138-97-1     100mg
    替硝唑相關(guān)物質(zhì)A標準品    696-23-1     100mg
原代細胞