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            上海研生實業(yè)有限公司
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            elisa酶聯(lián)免疫試劑盒
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            科研細(xì)胞
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            原代細(xì)胞實驗中淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的實驗

            時間:2018-3-7閱讀:205
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            原代細(xì)胞實驗中正常機體的T淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中受到特異性抗原或有絲分裂原刺激??赊D(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。細(xì)胞免疫缺陷時,患惡性腫瘤或某些其他疾病時。轉(zhuǎn)化率顯然降低。目前zui常用植物血凝素(PHA)作為分裂原來檢測受試者的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率,從而判定其細(xì)胞免疫功能,稱為PHA刺激淋巴細(xì)胞實驗的轉(zhuǎn)化實驗。
            實驗材料       
            肝素
            試劑、試劑盒    
            199培養(yǎng)液小牛血清鏈霉素青霉素PHA
            儀器、耗材    
            注射器針頭試管吸管離心機
            實驗步驟       
            1.  采肝素抗凝血1~2毫升(1毫升血中加肝素20單位)充分混勻。37℃靜置1~2小時。紅細(xì)胞沉淀后,吸取血漿層并捎帶些紅細(xì)胞。移入另一無菌試管中。計算白細(xì)胞數(shù)然后2000 rpm 離心10分鐘。棄上清液。用199培養(yǎng)液將沉淀的白細(xì)胞配成1×107/毫升細(xì)胞懸液。
            2.  取細(xì)胞懸液0.6毫升(6×106細(xì)胞)加入含有2.4毫升199培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。
            3.  按每毫升營養(yǎng)液加30 ug PHA加入PHA。
            4.  37℃孵育68~72小時。培養(yǎng)過程中,每天翻動培養(yǎng)瓶1~2次。
            5.  培養(yǎng)后。振蕩培養(yǎng)瓶。將細(xì)胞重新懸起,然后移入試管中。
            6.  1000 rpm 離心5分鐘。
            7.  盡量棄去上清液,將沉淀物混勻,取一滴放在載玻片上,推成血膜(頭、體、尾分明)干燥,用瑞特氏染液染色)鏡檢。
            8.  原代細(xì)胞實驗中計算淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率:油鏡下觀察每張玻片的頭、體、尾三段。每段各一縱列(目的是減少推片中細(xì)胞分布不均的誤差)。
            9.  每張玻片記數(shù)200~400個細(xì)胞,計算轉(zhuǎn)化率其中頭部50~100,體部50~100,尾部100~200細(xì)胞。 一般認(rèn)為轉(zhuǎn)化率的正常值為60~70%
            Acetaminophen    對乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品    103-90-2    400mg
            8-Bromotheophylline    8-溴茶堿標(biāo)準(zhǔn)品    10381-75-6    400mg
                ALPHA-乳白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品        400mg
                氟化牙粉:單氟磷酸鈉/磷酸氫鈣標(biāo)準(zhǔn)品        4.6oz
                氟化牙粉:單氟磷酸鈉-碳酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品        4.6oz
                氟化牙粉:氟化鈉/二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)品        4.5oz
            Methyl Alcohol     甲醇標(biāo)準(zhǔn)品    67-56-1     3x1.5ml
            Diethanolamine    二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品    111-42-2    3ml
                三乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品    102-71-6     3ml
                帕立骨化醇溶液標(biāo)準(zhǔn)品        3ml
                曲沃前列素標(biāo)準(zhǔn)品        3ml
            Potassium Bitartrate (AS)    酒石酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品    868-14-4     3g
            原代細(xì)胞

             

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