內(nèi)素概念

  內(nèi)素，是革蘭氏陰性細(xì)胞壁中的一種成分，叫做脂多糖。脂多糖對(duì)宿主是有性的。內(nèi)素只有當(dāng)死亡溶解或用人工方法菌細(xì)胞后才釋放出來，所以叫做內(nèi)素。

  其性成分主要為類脂質(zhì)A。內(nèi)素位于細(xì)胞壁的較外層、覆蓋于細(xì)胞壁的黏肽上。的內(nèi)素的性作用較弱，大致相同，可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)素休克及播散性內(nèi)凝血等。內(nèi)素可以用鱟試劑檢測(cè)。

內(nèi)素的

被污染的產(chǎn)品內(nèi)素即使在生產(chǎn)中采取了的工藝和嚴(yán)格的預(yù)防措施,原液仍有可能被污染,如何處理已被污染的原液是比較棘手的問題。因?yàn)樵褐型ǔＲ鸭尤氡Ｗo(hù)劑,重新純化是困難的。如果原液及保護(hù)劑的分子量與內(nèi)素分子量差別較大,那么選用適當(dāng)?shù)牡臑V膜,通過濾來內(nèi)素是可能的,但由于膜吸附過程中產(chǎn)熱及系統(tǒng)殘留等原因,活性損失較大。

生物制品在生產(chǎn)過程中內(nèi)素也是純化環(huán)節(jié)中重要一環(huán)節(jié)。生物制品的純化,主要是采用柱層析,如疏水層析、離子交換、親和層析、分子篩等,這些純化目標(biāo)產(chǎn)品的同時(shí)也可以內(nèi)素。

三、層析介質(zhì)內(nèi)素原理和情況

1.分子篩：分子篩是利用凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)根據(jù)分子大小進(jìn)行分離的一種方法。一般重組產(chǎn)品分子量為幾萬道爾頓,而內(nèi)素分子量為幾十萬至上百萬道爾頓,常是多聚體,因此利用分子篩可以內(nèi)素,但其處理量小,處理時(shí)間較長(zhǎng)。

2.疏水層析：內(nèi)素的脂肪A部份有很強(qiáng)的疏水性,但在高鹽下會(huì)凝集,無法掛上疏水層析柱。可選擇能結(jié)合目標(biāo)蛋白的疏水介質(zhì)而內(nèi)素。

3.離子交換：離子交換法是通過帶電的溶質(zhì)分子與離子交換劑中可交換的離子進(jìn)行交換而分離純化的方法。內(nèi)素在pH>2時(shí)帶負(fù)電荷,與陰離子交換介質(zhì)Q Bio-sep FF或DEAE Bio-sep FF有較強(qiáng)結(jié)合,可在洗脫目標(biāo)蛋白后用高鹽緩沖液或NaOH,這是離子交換法內(nèi)素的基礎(chǔ)。Pharmacia公司已研究利用離子交換層析法從白蛋白中內(nèi)素的工藝,主要采用DEAE Sepharose Fast Flow介質(zhì),將被內(nèi)素污染的白蛋白上柱,白蛋白和大部分內(nèi)素結(jié)合于介質(zhì)上,先清洗掉不結(jié)合的內(nèi)素,然后選擇性洗脫白蛋白。

4.親合層析：親合層析,是吸附劑在生產(chǎn)中的運(yùn)用使得生物大分子的純化變得簡(jiǎn)單。吸附的原理基于抗原、抗體的性作用,以目標(biāo)蛋白作為抗原,將通過雜交瘤生產(chǎn)的單克隆抗體偶聯(lián)于介質(zhì)上,以此介質(zhì)來吸附目標(biāo)蛋白。由于相互作用的高度性,理論上有目標(biāo)蛋白吸附于介質(zhì)上,內(nèi)素穿透,洗脫后將得到純度很高的無熱原產(chǎn)品。實(shí)際上,由于介質(zhì)本身存在的非性吸附,仍有少量的雜蛋白和內(nèi)素同時(shí)被吸附,但內(nèi)素含量是的。在干擾素(IFN)生產(chǎn)中,洗脫物內(nèi)素含量一般為0.25EUmL-1。

目前較為的處理方法是采用親和層析將素底物LAL或多粘菌素B(PMB)偶聯(lián)于CNBr activated Bio-sep FF或NHS-activated Bio-sep FF上,以此介質(zhì)性吸附內(nèi)素,而讓蛋白通過。

產(chǎn)品供應(yīng)：

上述產(chǎn)品齊岳生物均可供應(yīng)，用于科研！

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