制備辣根過氧化物酶（HRP）半抗原標(biāo)記物的簡單介紹

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過氧化物酶HRP是什么？

過氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP），通常來源于辣根（因此稱辣根過氧化物酶），是臨床檢驗(yàn)試劑中的常用酶。該產(chǎn)品不但用于多個(gè)生化檢測項(xiàng)目，也運(yùn)用于類（ELISA）試劑盒。HRP分布于植物界，它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多個(gè)同功酶組成,分子量為40,000,等電點(diǎn)為pH3~9 ,酶催化的適PH因供氫體不同而稍有差異，但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下的硫酸銨溶液。用半抗原科研與酶偶聯(lián)、制備半抗原酶標(biāo)記物時(shí),通常要求半抗原與酶的克分子比率在10左右。比率過高,會(huì)導(dǎo)致復(fù)合物中酶含量降低,因而削弱檢測信號(hào)強(qiáng)度。相反，如果比例過低 ，也會(huì)因空間屏蔽作用酶標(biāo)半抗原與抗體的反應(yīng)而降低測定的靈敏度。

辣根過氧化物酶標(biāo)記方法

酶標(biāo)記抗體的制備方法主要有兩種，即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。

辣根過氧化物酶的標(biāo)記常用過碘酸鹽氧化法，這種方法法只適用于含糖量較高的酶。過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基，醛基與抗體分子上的氨基形成Schiff堿而結(jié)合。后者可進(jìn)一步用NaBH (或乙醇胺)還原生成穩(wěn)定的酶標(biāo)記抗體。

HRP的NalO4標(biāo)記法.

原理: HRP為一種糖蛋白(glycoprotein), 其所帶的糖基上的糖環(huán)能被氧化開環(huán)，在2,3-位的一C-C-斷開。在適當(dāng)?shù)难趸瘲l件下，2, 3-位羥基能被氧化為醛基。醛基在堿性條件下可與被標(biāo)記物的自由氨基(-NH2)形成Shiff堿(-N=CH-), Shiff 堿不穩(wěn)定，可由逆反應(yīng)解離。Shiff 堿可由還原劑還原成一CH2一NH一，在HRP與被標(biāo)記物間形成穩(wěn)定的共價(jià)交聯(lián)oHRP的NalO4標(biāo)記法所用氧化劑為NalO4,還原劑采用NaBH4。

為了HRP的過度氧化，在整個(gè)標(biāo)酶的過程中應(yīng)盡量避光。光照可加快過碘酸鈉對(duì)HRP糖基的氧化，如在標(biāo)記過程中不避光，則不可控因素太多。

以下是部分產(chǎn)品列表：