色譜分析的重要作用之一是對(duì)樣品進(jìn)行定量，色譜定量的依據(jù)是：組分的重量或濃度與檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)成正比。選擇合適的定量方法時(shí)，除需要考慮相對(duì)定量還是絕對(duì)定量外，同時(shí)也需要考察化合物的線性響應(yīng)范圍、是否有合適內(nèi)標(biāo)、是否有標(biāo)準(zhǔn)品等。常見(jiàn)的定量方法有內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、面積歸一法、加校正因子的主成分自身對(duì)照法與不加校正因子的主成分自身對(duì)照法等。本文將對(duì)zui常用的內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、面積歸一法三種方法進(jìn)行介紹。
內(nèi)標(biāo)法
內(nèi)標(biāo)法是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加到一定量的被分析樣品混合物中，根據(jù)測(cè)試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比及相對(duì)校正因子，來(lái)計(jì)算被測(cè)組分的含量。
精密稱(chēng)（量）取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，各精密量取適量，混合配成校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液。取一定量進(jìn)樣，測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積，計(jì)算校正因子。
再取按標(biāo)準(zhǔn)制備中含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)量供試品中待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積，再計(jì)算含量（其中Ax：供試品圖中待測(cè)成份峰面積；A`S: 供試品圖中內(nèi)標(biāo)物峰面積；C`S：供試品圖中內(nèi)標(biāo)物濃度）。
內(nèi)標(biāo)物的選擇要求：
a
原樣品中不含組分；
b
與待測(cè)物保留時(shí)間應(yīng)接近，但不重疊；
c
為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或含量已知物質(zhì)；
d
在給定色譜條件下具有一定化學(xué)穩(wěn)定性。
外標(biāo)法
外標(biāo)法是用待測(cè)組分的純品作對(duì)照物質(zhì)，以對(duì)照物質(zhì)和樣品中待測(cè)組分的響應(yīng)信號(hào)相比較進(jìn)行定量的方法。它不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測(cè)樣品中，而是在與被測(cè)樣品相同的色譜條件下單獨(dú)測(cè)定，把得到的色譜峰面積與被測(cè)組分的色譜峰面積進(jìn)行比較求得被測(cè)組分的含量。此法可分為外標(biāo)一點(diǎn)法與標(biāo)準(zhǔn)曲線法。
標(biāo)準(zhǔn)曲線法：是用對(duì)照物質(zhì)配制一系列濃度的對(duì)照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在*相同的條件下，準(zhǔn)確進(jìn)樣與對(duì)照品溶液相同體積的樣品溶液，根據(jù)待測(cè)組分的信號(hào)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度，或用回歸方程計(jì)算，工作曲線法也可以用外標(biāo)二點(diǎn)法代替。
外標(biāo)一點(diǎn)法：是用一種濃度的對(duì)照品溶液對(duì)比測(cè)定樣品溶液中組分的含量。
精密稱(chēng)（量）取對(duì)照品和供試品，配制成溶液，分別精密稱(chēng)取一定量，進(jìn)樣，測(cè)量對(duì)照品溶液和供試品溶液中待測(cè)物質(zhì)的峰面積（或峰高）來(lái)進(jìn)行計(jì)算：
如標(biāo)準(zhǔn)中有系統(tǒng)適用性要求，首先需確認(rèn)系統(tǒng)溶液能滿(mǎn)足條件，否則檢測(cè)無(wú)效。一般要求對(duì)照品配制兩份，一份連續(xù)進(jìn)5針以計(jì)算RSD，如無(wú)特殊要求，RSD不超過(guò)2%。符合了，說(shuō)明系統(tǒng)沒(méi)問(wèn)題，再進(jìn)行后面的實(shí)驗(yàn)。樣品也同樣需要配制兩份，兩份樣品最終結(jié)果的RSD同樣不能超過(guò)2.0%。
面積歸一法
由于組分的量與其峰面積成正比，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，配制供試品溶液，取一定量進(jìn)樣并記錄色譜圖，測(cè)得各峰的峰面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計(jì)算各峰面積占總峰面積的百分比。
計(jì)算公式：
總雜（%）=1-主成分峰面積百分比
單雜峰直接從積分結(jié)果表中讀取即可
此法結(jié)果很不準(zhǔn)確，一般在工藝研究、原料合成過(guò)程中的中間體等中用來(lái)檢測(cè)大致數(shù)據(jù)做參考用。
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