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反相高效液相色譜柱的保護(hù)要怎么做

閱讀：2641 發(fā)布時(shí)間：2020-6-24
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　　反相高效液相色譜柱的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分先被沖洗出，而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。

　　選擇合適的色譜柱可以縮短方法開(kāi)發(fā)時(shí)間，并使開(kāi)發(fā)的方法更穩(wěn)定。色譜柱的選擇包括分離模式、色譜填料基質(zhì)及基質(zhì)物理化學(xué)性質(zhì)等。

　　反相高效液相色譜柱的保護(hù)：
　　1、用預(yù)柱。（但要注意，若有時(shí)出峰異常，要先看看是不是它有問(wèn)題了）

　　2、每次做完分析，都要進(jìn)行沖洗，分析用流動(dòng)相中若無(wú)酸、鹽類(lèi)物質(zhì)，建議用90%甲醇沖洗30~60min；若分析用流動(dòng)相中含以上物質(zhì)，要先用10%甲醇沖洗1小時(shí)左右，再梯度走到90%甲醇沖洗30~60min。有必要時(shí)再循環(huán)幾次，可以適當(dāng)縮短時(shí)間。
　　若長(zhǎng)時(shí)間不用該色譜柱，要沖洗好后，用純甲酵或乙封存。

　　3、若流動(dòng)相中用到離子對(duì)試剤，更應(yīng)該好好沖洗，且該色譜柱作為專(zhuān)用，不能再做其它物質(zhì)分析用。因色譜柱填料性質(zhì)已與原來(lái)所不同，在該柱上所摸索的色譜條件，可能在其它同類(lèi)柱子上得不到重現(xiàn)。

　　4、盡量避免反沖，除非該色譜柱明確說(shuō)明允許。

　　5、普通C18柱盡量避免在40℃以上的溫度下分析。

　　6、定期測(cè)柱效，有下降，可以用10%異丙醇甲醇沖洗色譜柱。若柱效還沒(méi)有改善，可以再生，甲醇二氯甲烷一甲。

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