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Quick Cell支原體快速檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))

產(chǎn)品描述
　　Quick Cell支原體快速檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))是專門用于快速檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑。本試劑盒操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)時(shí)間短，只需吸取1 μl細(xì)胞培養(yǎng)上清加入反應(yīng)體系中，60℃孵育1h，肉眼觀察即可判定結(jié)果，與傳統(tǒng)檢測(cè)支原體的PCR法優(yōu)勢(shì)明顯。本試劑盒檢測(cè)范圍廣，可以檢測(cè)：(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細(xì)胞的支原體(注：M.為Mycoplasma的縮寫)。以上13種支原體約占細(xì)胞支原體污染的99%以上。絕大多數(shù)支原體污染集中于前8種。因此非常適合于與細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的科研實(shí)驗(yàn)室及企業(yè)的日常支原體檢測(cè)。
訂購(gòu)信息

保存方法
　　冰袋運(yùn)輸，-20℃保存，保質(zhì)期3年。
實(shí)驗(yàn)操作流程
1.待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清收集
對(duì)于貼壁細(xì)胞，待測(cè)的樣品建議來源于至少培養(yǎng)三天以上且匯合度在70-90%左右的細(xì)胞培養(yǎng)上清，中途不再換液，此時(shí)上清中支原體含量較高，便于檢出，無需離心，直接吸取上清。對(duì)于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，也需要在換液或者傳代后讓細(xì)胞生長(zhǎng)3天以上，再取培養(yǎng)液進(jìn)行檢測(cè)，也無需離心，哺乳動(dòng)物細(xì)胞的存在不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。
【注】：收集的待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液樣品如果不立即檢測(cè)，請(qǐng)放于-20℃或-80℃冰箱保存。樣品在-20℃至少可以保存一個(gè)月，在-80℃可以長(zhǎng)期保存。
2.反應(yīng)體系的配制
將溶液Ⅰ、Ⅲ從-20℃冰箱中取出，室溫放置待其融化，液態(tài)溶液Ⅱ需一直置于冰上備用。溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000 rpm離心30 s，用移液槍吹洗均勻。三種試劑按表1比例混合，吹打均勻后，按每管24 μL 的量分裝到0.2 mL透明度良好的薄壁PCR管中。接著，往陽性對(duì)照管(Positive)中加入1 μL 陽性支原體DNA，往陰性對(duì)照管(Negative)中加入1 μL 無菌水，往測(cè)試管(Test)中加入1 μL 待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液，反應(yīng)液的總體積為25 μL。
【注】：裝有陽性支原體DNA的螺口管開蓋之前，用迷你離心機(jī)離心下；進(jìn)行反應(yīng)體系配制的房間，與進(jìn)行樣品前處理、加陽性對(duì)照DNA、樣品DNA的房間建議分開。
表1：恒溫反應(yīng)體系的配制

【注】：每次實(shí)驗(yàn)加上一個(gè)陰性對(duì)照、一個(gè)陽性對(duì)照，便于結(jié)果的判斷和分析。如有多個(gè)樣品，為了避免移液時(shí)損失，分裝時(shí)建議溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系數(shù)1.08，保證每個(gè)反應(yīng)管中的反應(yīng)液足量。
3. 反應(yīng)
PCR儀設(shè)置程序：61℃，60 min，熱蓋溫度，100 ℃。
【注】：若實(shí)驗(yàn)室所沒有PCR儀，反應(yīng)也可以在水浴鍋中進(jìn)行，需要在每管中加入25 μL礦物油，以防止液體蒸發(fā)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。水浴鍋顯示溫度與實(shí)際溫度的溫差建議不超過0.5℃，放入已經(jīng)升溫到61℃的水浴內(nèi)，準(zhǔn)確反應(yīng)60 min。
4. 結(jié)果判斷
61℃反應(yīng)60 min后，立刻取出反應(yīng)管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過反應(yīng)管溶液顏色的變化，即可判斷檢測(cè)結(jié)果。如果溶液為藍(lán)綠色，則說明有支原體污染；如果為紫紅色，則說明沒有支原體污染(如圖1)。顏色反應(yīng)如下圖所示，也可以以陰性對(duì)照與陽性對(duì)照作為參考。
【注】：在61℃反應(yīng)的時(shí)間必須準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，多不得超過5 min，以免出現(xiàn)假陽性。反應(yīng)產(chǎn)物不可開蓋，防止產(chǎn)生氣溶膠會(huì)導(dǎo)致假陽性的出現(xiàn)，必須在反應(yīng)后2 h 內(nèi)進(jìn)行結(jié)果判斷，避免室溫下擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行，影響結(jié)果判別。在少數(shù)情況下(如支原體含量較低)，溶液顏色可能會(huì)介于紫色和天藍(lán)色之間，此時(shí)可將反應(yīng)時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)到80 min，如果顏色變?yōu)樗{(lán)色，則判定為陽性，否則為陰性。

               

產(chǎn)品圖片

注意事項(xiàng)
1．必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體，盡量用新購(gòu)移液器、新開封的槍頭操作。整個(gè)操作過程，佩戴口罩，不要開口說話。由于本試劑盒非常靈敏，移液槍如吸附有，或者人為帶入支原體均有可能造成假陽性。
2．建議使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽性支原體等。如果沒有帶濾芯的吸頭，至少應(yīng)該使用新開封的吸頭。
3．檢測(cè)過程中，用過的各類吸頭、離心管務(wù)必小心處理，應(yīng)裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶?jī)?nèi)。反應(yīng)后的PCR管，不要開蓋，用過后將其用自封袋密閉，扔到遠(yuǎn)離細(xì)胞房的獨(dú)立垃圾桶內(nèi)。
4．如果細(xì)胞被支原體污染，可以選購(gòu)本公司或其他供應(yīng)商提供的去除試劑盡早去除。
表2：Quick Cell 支原體快速檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))的優(yōu)勢(shì)

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