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淋巴細(xì)胞分離液
閱讀：3047發(fā)布時(shí)間：2015-12-24
分離目的
方便在人體外對(duì)機(jī)體各種免疫細(xì)胞分別作鑒定，計(jì)數(shù)或功能測(cè)定。 淋巴細(xì)胞分離以后可以做淋巴細(xì)胞抗原片制備，E花環(huán)試驗(yàn)，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（需無(wú)菌操作） 【分離原理】 人 淋巴細(xì)胞的方便來(lái)源是外周血，分離的原則是收率較高，純度較好，失活較低，根據(jù)不同試驗(yàn)有相對(duì)純度，無(wú)論采用哪種方法，應(yīng)盡zui大可能保持細(xì)胞應(yīng)有活性。分 離的技術(shù)可根據(jù)細(xì)胞的物理性狀和表面標(biāo)志設(shè)計(jì)，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康目刹捎妹芏忍荻入x心法、吸附分離法和其它特殊分離法。此次實(shí)驗(yàn)采用的1就是密度梯度離心法。其原理是：人外周血中各種細(xì)胞的密度不同，人紅細(xì)胞密度為1.093，粒細(xì)胞為1.092，淋巴細(xì)胞為1.074±0.001。密度梯度離心法的原理主要根據(jù)各類血細(xì)胞比重的差異，利用比重介于某兩類細(xì)胞之間的細(xì)胞分離液對(duì)血液離心，使一定比重的血細(xì)胞依相應(yīng)的密度梯度分布于不同的獨(dú)立帶，從而達(dá)到分離的目的。
材料
1、肝素抗凝管，普通管（負(fù)壓），采血針，血清收集管 2、淋巴細(xì)胞分離液(比重1.077 – 1.080 g/mL）。 3、無(wú)Ca++、Mg++、Hank's 液 4、刻度吸管、毛細(xì)吸管、離心管、離心機(jī)等。 5置于冰箱的冷丙酮（固定細(xì)胞，保持細(xì)胞的完整性）
方法
1．采靜脈血2ml加入肝素抗凝管（或枸櫞酸鈉），3ml加入普通管。 2．普通管斜面放置30MIN，此時(shí)可分離淋巴細(xì)胞。用竹簽將血塊輕輕剝離管壁（主張用玻璃棒），2000rPm離心20分鐘，用毛細(xì)吸管吸取上清（血清）于血清收集管中，于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫糜谝院蟮腅LISA實(shí)驗(yàn)，對(duì)流免疫電泳實(shí)驗(yàn)和傷寒試管凝集實(shí)驗(yàn)，溶血反應(yīng)，免疫比濁測(cè)定補(bǔ)體C3或C4等等。（剝離時(shí)也可用毛細(xì)吸管輕輕剝離）
方便在人體外對(duì)機(jī)體各種免疫細(xì)胞分別作鑒定，計(jì)數(shù)或功能測(cè)定。 淋巴細(xì)胞分離以后可以做淋巴細(xì)胞抗原片制備，E花環(huán)試驗(yàn)，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（需無(wú)菌操作） 【分離原理】 人 淋巴細(xì)胞的方便來(lái)源是外周血，分離的原則是收率較高，純度較好，失活較低，根據(jù)不同試驗(yàn)有相對(duì)純度，無(wú)論采用哪種方法，應(yīng)盡zui大可能保持細(xì)胞應(yīng)有活性。分 離的技術(shù)可根據(jù)細(xì)胞的物理性狀和表面標(biāo)志設(shè)計(jì)，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康目刹捎妹芏忍荻入x心法、吸附分離法和其它特殊分離法。此次實(shí)驗(yàn)采用的1就是密度梯度離心法。其原理是：人外周血中各種細(xì)胞的密度不同，人紅細(xì)胞密度為1.093，粒細(xì)胞為1.092，淋巴細(xì)胞為1.074±0.001。密度梯度離心法的原理主要根據(jù)各類血細(xì)胞比重的差異，利用比重介于某兩類細(xì)胞之間的細(xì)胞分離液對(duì)血液離心，使一定比重的血細(xì)胞依相應(yīng)的密度梯度分布于不同的獨(dú)立帶，從而達(dá)到分離的目的。
材料
1、肝素抗凝管，普通管（負(fù)壓），采血針，血清收集管 2、淋巴細(xì)胞分離液(比重1.077 – 1.080 g/mL）。 3、無(wú)Ca++、Mg++、Hank's 液 4、刻度吸管、毛細(xì)吸管、離心管、離心機(jī)等。 5置于冰箱的冷丙酮（固定細(xì)胞，保持細(xì)胞的完整性）
方法
1．采靜脈血2ml加入肝素抗凝管（或枸櫞酸鈉），3ml加入普通管。 2．普通管斜面放置30MIN，此時(shí)可分離淋巴細(xì)胞。用竹簽將血塊輕輕剝離管壁（主張用玻璃棒），2000rPm離心20分鐘，用毛細(xì)吸管吸取上清（血清）于血清收集管中，于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫糜谝院蟮腅LISA實(shí)驗(yàn)，對(duì)流免疫電泳實(shí)驗(yàn)和傷寒試管凝集實(shí)驗(yàn)，溶血反應(yīng)，免疫比濁測(cè)定補(bǔ)體C3或C4等等。（剝離時(shí)也可用毛細(xì)吸管輕輕剝離）
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