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不同來源人間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng)及傳代 臍帶 脂肪
閱讀：4074發(fā)布時間：2018-1-4
人間充質(zhì)干細胞的不同來源
人類骨髓來源間充質(zhì)干細胞
新生兒臍帶來源間充質(zhì)干細胞
新生兒臍帶血來源間充質(zhì)干細胞
人類臍帶華通氏膠來源間充質(zhì)干細胞
人類脂肪來源間充質(zhì)干細胞
人類羊水來源間充質(zhì)干細胞
人類牙髓來源間充質(zhì)干細胞
人類皮膚來源間充質(zhì)干細胞
新生兒胎盤來源間充質(zhì)干細胞
人類唾液腺來源間充質(zhì)干細胞
人類滑膜來源間充質(zhì)干細胞
1 人類骨髓來源間充質(zhì)干細胞
密度梯度離心骨髓，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
人類骨髓來源間充質(zhì)干細胞分離
Ficoll密度梯度離心
人類骨髓來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
Knock out DMEM，DMEM+10%FBS
2 新生兒臍帶來源間充質(zhì)干細胞 新生兒臍帶血來源間充質(zhì)干細胞
組織塊培養(yǎng)法、密度梯度離心法等處理臍帶、臍帶血，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
新生兒臍帶來源間充質(zhì)干細胞 新生兒臍帶血來源間充質(zhì)干細胞分離
Ficoll-Hypaque 密度梯度離心，酶消化法（0.25% 胰蛋白酶-EDTA），組織塊培養(yǎng)法
新生兒臍帶來源間充質(zhì)干細胞 新生兒臍帶血來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
DMEM+10%FBS，10%FCS，MSCGM+10%FCS
3人類臍帶華通氏膠來源間充質(zhì)干細胞
組織塊培養(yǎng)法、酶消化法處理華通氏膠，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
人類臍帶華通氏膠來源間充質(zhì)干細胞分離
組織塊培養(yǎng)法, 酶消化法 (0.1% 膠原酶II,1 mg/ml 膠原酶B+胰蛋白酶, 膠原酶 +hyaluronidase +胰蛋白酶,胰蛋白酶-EDTA, 0.26% 膠原酶I+ 0.07% hyaluronidase+0.125% 胰蛋白酶)
人類臍帶華通氏膠來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
DMEM/DMEM-F12 + 10% FBS
4 人類脂肪來源間充質(zhì)干細胞
酶消化法處理脂肪組織，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
人類脂肪來源間充質(zhì)干細胞分離
酶消化法(1.5 mg/ml 膠原酶 I, 1 mg/ml 膠原酶-I in 0.1% BSA)
人類脂肪來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
DMEM-Low Glucose+MCDB201+ 2% FCS,DMEM+ 20% FBS,MesenproRS
5 人類羊水來源間充質(zhì)干細胞
密度梯度離心、酶消化法處理羊水，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
人類羊水來源間充質(zhì)干細胞分離
密度梯度離心,酶消化法 (0.25% 胰蛋白酶 +1.2 units/ml of dispase + 2 mg/ml 膠原酶I）
人類羊水來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
a-MEM + 20% FBS, DMEMF12 + 10% FBS, high glucose DMEM + 20% hESC-defined FBS, KSR-based 培養(yǎng)基
6 人類牙髓來源間充質(zhì)干細胞
酶消化法處理牙髓，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
人類牙髓來源間充質(zhì)干細胞分離
酶法 (387.1 U/+mg 膠原酶+ 0.70 U/mg dispase II)
人類牙髓來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
D-MEM-F12, a-MEM + 2% FCS
7 人類皮膚來源間充質(zhì)干細胞
酶消化法處理皮膚組織，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
人類皮膚來源間充質(zhì)干細胞分離
酶消化法 (0.6 U/ml dispase, 0.62 Wunsch U/ml Liberase Blendzyme 1,1.25 mg/ml 膠原酶 I)
人類皮膚來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
DMEM-F12 1 10/5/0.5% FBS, DMEM + 20% FBS
8 新生兒胎盤來源間充質(zhì)干細胞
Ficoll 密度梯度離心、酶消化法處理胎盤，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
新生兒胎盤來源間充質(zhì)干細胞分離
Ficoll 密度梯度離心, 酶消化法(1 mg/ml Dispase, 300 U/ml 膠原酶, 100 U/ml Hyalluronidase,
80 U/ml DNAse I, 0.25% 胰蛋白酶-EDTA)
新生兒胎盤來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
DMEM 低糖 + 20% FBS
9 人類唾液腺來源間充質(zhì)干細胞
酶消化法處理唾液腺，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
人類唾液腺來源間充質(zhì)干細胞分離
酶消化 (1.67 mg/ml 膠原酶+ 1.33 mg/ml hyaluronidase, 1.67 mg/ml dispase; 5.01 mg/ml 膠原酶2 + 3.99 mg/ml hyaluronidase,33.4 mg/ml dispase)
人類唾液腺來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
DMEM + 10% FCS, DMEMF12 + 3% FBS
10 人類滑膜來源間充質(zhì)干細胞
Ficoll–Paque 密度梯度離心、酶消化法處理滑膜，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞。
人類滑膜來源間充質(zhì)干細胞分離
Ficoll–Paque 密度梯度離心, 酶消化法 (3mg/ml 膠原酶V)
人類滑膜來源間充質(zhì)干細胞原代及傳代培養(yǎng)
a-MEM + 10% FBS, 20% FBS
名詞解釋
Ficoll密度梯度離心 常用來分離人外周血單個核細胞（PBMC）的分層液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分層液。Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，平均分子量為400,000，當(dāng)密度為1.2g／ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細胞、粒細胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞，就可從外周血中分離到單個核細胞。Ficoll-Paque 分離液適用血液、骨髓和臍帶血來源的人單個核細胞分離（包括間充質(zhì)干細胞）。
DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium是一種廣泛使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可用于支持很多種類的哺乳動物細胞生長。
組織塊培養(yǎng)法 組織切成小塊，接種培養(yǎng)器皿培養(yǎng)細胞。
酶消化法 用胰蛋白酶和膠原酶等消化組織塊，分離細胞進行培養(yǎng)。
膠原酶 是一種蛋白酶，它能夠特異性的結(jié)合 Pro-X-Glyc-Pro序列中，中性氨基酸（X）和甘氨酸之間的肽鍵。該序列高頻率的存在于膠原中。膠原酶是*的一種可以降解廣泛存在于結(jié)締組織中的具有三股螺旋的天然膠原纖維的蛋白酶。
Hyaluronidase 透明質(zhì)酸酶
Dispase 分散酶
DNAse 脫氧核糖核酸酶
附：人間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)
人間充質(zhì)干細胞的下游應(yīng)用是組織修復(fù)等疾病治療，因此它的培養(yǎng)要滿足醫(yī)用的高標(biāo)準(zhǔn)。隨著臨床應(yīng)用的成熟，間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基也經(jīng)歷了從有血清到無血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)變。
有血清培養(yǎng)基一開始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然產(chǎn)品，批次間差異大，影響實驗穩(wěn)定性，尤其還是異源物，會有病原體污染風(fēng)險和免疫影響，不利治療安全，需要額外監(jiān)管。于是越來越多的血清培養(yǎng)基選擇了自體或同源異體的人源血清作為培養(yǎng)基添加物，包括人血清、血小板裂解液和臍帶血清。
低血清或人源血清仍然不夠穩(wěn)定，也不能*免除病原體的污染風(fēng)險，隨之興起的是成分確定的無血清培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基用重組人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此來消滅異種蛋白輸入人體可能會引起的免疫抗體反應(yīng)。比如血清中zui基礎(chǔ)的白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素，無血清培養(yǎng)基都改用重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白和重組人胰島素代替，而不是提取天然產(chǎn)物。無血清培養(yǎng)基發(fā)展中，確定了多種生長因子是人間充質(zhì)干細胞擴增必須添加的。
相關(guān)產(chǎn)品
Ficoll 密度梯度分離液 Ficoll-Paque PREMIUM改良于Ficoll-Paque PLUS，后者作為一種從骨髓、外周血和臍帶血中高得率分離單個核細胞的無菌密度梯度介質(zhì)已應(yīng)用了三十多年。與Ficoll-Paque PLUS不同的是，F(xiàn)icoll-Paque PREMIUM的生產(chǎn)是在嚴(yán)格控制環(huán)境下完成的, 生產(chǎn)條件符合ISO 13485:2003標(biāo)準(zhǔn)，GMP認(rèn)證和美國藥典的建議，可用于生產(chǎn)細胞治療相關(guān)產(chǎn)品。細胞毒性等級為0。有RSF文件。
膠原酶 I 型膠原酶從溶組織梭菌制備，用于細胞和組織的解離。
人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基 與以DMEM為基礎(chǔ)的血清培養(yǎng)基相比優(yōu)勢在于，成分確定，無動物源成分，適合臨床研究。HY StemCell CCGmHumTM 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基是成分確定、無血清、無動物源，無需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來源的人間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng)。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基包括【Basal Medium 基礎(chǔ)培養(yǎng)基】 和 【Supplement Medium 細胞因子添加物】兩部分?；A(chǔ)培養(yǎng)基中添加Hepes和L-谷氨酰胺。細胞因子添加物中含有多種細胞生長因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。
產(chǎn)品信息
密度梯度分離液 膠原酶
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 | 包裝 |
GE | 17-1440-02 | Ficoll-Paque PLUS,1.078 g/ml密度梯度分離液 | 6 × 100 ml |
GE | 17-1440-03 | Ficoll-Paque PLUS,1.078 g/ml密度梯度分離液 | 6 × 500 ml |
GE | 17-5442-02 | Ficoll-Paque PREMIUM,1.077 g/ml密度梯度分離液 | 6 × 100 ml |
GE | 17-5442-03 | Ficoll-Paque PREMIUM,1.077 g/ml密度梯度分離液 | 6 × 500 ml |
Gibco | 17100017 | Collagenase, Type I, powder 膠原酶 | 1 g |
人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 |
|
HY StemCell | CCGmHuMTM Human MSCs Medium 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基 |
| |
StemCell | 05420 | MesenCultTM-XF Medium，Defined, xeno-free medium for human mesenchymal stem cells 人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基 |
|
StemRD | MGro-500 | MSC medium,chemically-defined, xeno-free 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基 |
|
LONZA | 12-725F | UltraCULTURETM Serum-free Medium 無血清培養(yǎng)基 |
|
人間充質(zhì)干細胞的鑒定參見人間充質(zhì)干細胞流式檢測方案
參考文獻
1 Dolly Mushahary, et al. Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017
2 人類間充質(zhì)干細胞庫建設(shè)與管理規(guī)范，SZDB/Z 126-2015
更多間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)產(chǎn)品華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司，紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司以“傳遞科學(xué)價值，服務(wù)科學(xué)研究”為宗旨，主營干細胞、醫(yī)療、細胞治療、器官再生四大板塊的產(chǎn)品。
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