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Reveal®2.0沙門氏菌檢測(cè)系統(tǒng)
閱讀：1648 發(fā)布時(shí)間：2020-6-9Reveal®2.0沙門氏菌檢測(cè)系統(tǒng)
不用時(shí)將檢測(cè)條儲(chǔ)存在15-30oC，將干粉培養(yǎng)基儲(chǔ)存在室溫下（15-30oC）
主要用途
Reveal®沙門氏菌檢測(cè)系統(tǒng)可用于快速鑒定食品及，物飼料和環(huán)境樣品中沙門氏菌，完成對(duì)沙門氏菌的檢測(cè)和初步鑒別只需要24小時(shí)。
測(cè)試原理
本系統(tǒng)利用REVIVE培養(yǎng)基，它能夠?yàn)樯抽T氏菌提供易利用的營(yíng)養(yǎng)成分，以及其它對(duì)受脅迫或損傷狀態(tài)下的沙門氏菌進(jìn)行恢復(fù)的必要因子。用REVIVE培養(yǎng)后，選擇性富集培養(yǎng)可使沙門氏菌生長(zhǎng)到能夠被Reveal檢測(cè)條檢出的水平。Reveal檢測(cè)詳述如下:
對(duì)于一些樣品，初的非選擇性培養(yǎng)可以饒過(guò)，直接將樣品引進(jìn)到RV培養(yǎng)基中。
對(duì)于那些非常黏稠，含色素，或者包含水平無(wú)法生活細(xì)胞的樣品，可選擇的第三種富集方法能夠檢測(cè)到其含有的沙門氏菌。在食品工業(yè)中，使用M肉湯培養(yǎng)是幾種的確定標(biāo)準(zhǔn)程序中的好選擇。
將少量富集培養(yǎng)物（120μl）放到樣品杯中，將檢測(cè)條浸入到樣品并在環(huán)境溫度下保持15分鐘。樣品通過(guò)毛細(xì)管作用滲過(guò)含特異性沙門氏菌抗體（與膠體金顆粒相偶聯(lián)）的試劑區(qū)。如果樣品中存在抗原（即沙門氏菌），它將與膠體記的抗體結(jié)合。該抗原-抗體復(fù)合物滲過(guò)試劑區(qū)，經(jīng)過(guò)含有沙門氏菌抗體（分布呈帶狀）的硝化纖維膜。該含金免疫復(fù)合物被捕獲并聚集在這個(gè)區(qū)域，從而顯示一條可見的線。剩余的樣品繼續(xù)遷移而進(jìn)入位于膜末端的廢液貯存處。
試劑區(qū)也含有針對(duì)廣譜抗原的金復(fù)合物（指示劑），無(wú)論沙門氏菌存在與否，它都會(huì)被樣品溶液釋放。膠體金復(fù)合物對(duì)照指示劑通過(guò)膜遷移到陰性對(duì)照捕獲區(qū)（含針對(duì)廣譜抗原的抗體區(qū)），捕獲并集結(jié)成一條可見線。無(wú)論沙門氏菌抗原存在與否，都會(huì)在質(zhì)控區(qū)形成對(duì)照線，以檢測(cè)過(guò)程操作正確無(wú)誤。
主要使用者
Reveal 2.0沙門氏菌測(cè)試系統(tǒng)旨為熟悉沙門氏菌分離與鑒定中無(wú)菌操作技術(shù)的人員而設(shè)計(jì)的。建議不具備微生物基礎(chǔ)知識(shí)的使用者參加Neogen公司的技能培訓(xùn)。
提供的材料
Reveal檢測(cè)條
20個(gè)沙門氏菌檢測(cè)條
20個(gè)移液管
20個(gè)反應(yīng)杯
REVIVE培養(yǎng)基
20瓶REVIVE培養(yǎng)基
20個(gè)培養(yǎng)袋
量杯
二次選擇性培養(yǎng)基
20裝2倍濃縮的RV培養(yǎng)基（2×RV）
20個(gè)培養(yǎng)袋
量杯
直接選擇培養(yǎng)基
20瓶1×RV培養(yǎng)基
20個(gè)培養(yǎng)袋
量杯
試劑盒不提供的必需品
天平（小刻度25g）
計(jì)時(shí)器
樣品杯架
無(wú)菌水
能保持36oC及42oC的培養(yǎng)箱
可選擇的設(shè)備
Reveal AccuScanⅢ 讀數(shù)儀器
均質(zhì)器
儲(chǔ)藏
不用時(shí)，檢測(cè)條應(yīng)儲(chǔ)存于15-30℃；干粉培養(yǎng)基儲(chǔ)存在室溫下（15-30℃）。
不同物品的檢測(cè)
本產(chǎn)品可有效地用于許多物品中沙門氏菌的檢測(cè)。還可從Neogen公司獲得，本產(chǎn)品進(jìn)行沙門氏菌檢測(cè)的物品明細(xì)表，同時(shí)備有對(duì)于不同物品檢測(cè)時(shí)的富集方法。
警惕
1 不要使用過(guò)期的培養(yǎng)基
2 打開裝檢測(cè)條的瓶子前，讓檢測(cè)條升至室溫
3 使用水化培養(yǎng)基須在6小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備
4 培養(yǎng)時(shí)間和溫度尤為重要，否則會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果
5 在培養(yǎng)過(guò)程中樣品袋不能扎得過(guò)緊，以便于空氣交換；這對(duì)沙門氏菌生長(zhǎng)及抗原表達(dá)至關(guān)重要
6 水化REVIVE培養(yǎng)基時(shí)無(wú)菌水應(yīng)該升至42oC，水化RV培養(yǎng)基時(shí)無(wú)菌水應(yīng)是36oC
7 選擇性富集的培養(yǎng)物的檢測(cè)應(yīng)在培養(yǎng)后的6小時(shí)內(nèi)完成
8采用良好微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程
1 樣品準(zhǔn)備及預(yù)培養(yǎng)
樣品富集1—適用于大多數(shù)食品和環(huán)境樣品
1 將1瓶REVIVE培養(yǎng)基（9705）或者7.2g大瓶裝的REVIVE培養(yǎng)基（9708）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至42℃的無(wú)菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解；
2 將25g樣品（樣品的溫度必須與室溫一致）加到含有REVIVE培養(yǎng)基的培養(yǎng)袋中，抓緊袋子并使樣品混勻，用一邊到另一邊的方式劇烈晃動(dòng)袋子，使確?；靹?；參考辦法：將袋子放到均質(zhì)器內(nèi)，用正常速度下混勻30秒鐘。
3 松散地緊閉袋子（見“警惕”第5步），放進(jìn)合適的架子或支撐物，36±1℃培養(yǎng)4小時(shí)
4將1瓶濃縮的2×RV培養(yǎng)基（9715）或者10.6g大瓶裝的RV培養(yǎng)基（9716）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至36℃的無(wú)菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解,在使用前保持在42℃
5將REVIVE培養(yǎng)袋子從36℃的溫箱取出放到合適的架子或支撐物上
6向樣品袋內(nèi)（共200ml）加入200ml預(yù)熱到42℃的預(yù)先制備的選擇性RV培養(yǎng)基，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用一邊到另一邊的方式輕輕混勻
7松散地扎上袋子口，并將其放到架子或支持物上，42oC培養(yǎng)16-24小時(shí)
樣品富集2—適用與挑選的食品，包括生的碎牛肉，生的碎家禽肉，生海鮮，家禽沖洗水
1將1瓶1×RV培養(yǎng)基（9729）或者5.3g大瓶裝的Rv培養(yǎng)基（9716）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至42℃的無(wú)菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解；
2將25g樣品（樣品的溫度必須與室溫一致）加到含有1×RV培養(yǎng)基的培養(yǎng)袋中，抓緊袋子并使樣品混勻，用一邊到另一邊的方式劇烈晃動(dòng)袋子，使確保混勻；參考辦法：將袋子放到均質(zhì)器內(nèi)，用正常速度下混勻30秒鐘。
3松散地扎上袋子口，并將其放到架子或支持物上，42oC培養(yǎng)20-24小時(shí)
樣品富集3—適用與潛在的困難樣品，包括干的寵物食品，高黏性或者高色素原料
1 將1瓶REVIVE培養(yǎng)基（9705）或者7.2g大瓶裝的REVIVE培養(yǎng)基（9708）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至42℃的無(wú)菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解；
2 將25g樣品（樣品的溫度必須與室溫一致）加到含有REVIVE培養(yǎng)基的培養(yǎng)袋中，抓緊袋子并使樣品混勻，用一邊到另一邊的方式劇烈晃動(dòng)袋子，使確?；靹?；參考辦法：將袋子放到均質(zhì)器內(nèi)，用正常速度下混勻30秒鐘。
3 松散地緊閉袋子（見“警惕”第5步），放進(jìn)合適的架子或支撐物，36±1℃培養(yǎng)4小時(shí)
4將1瓶濃縮的2×RV培養(yǎng)基（9715）或者10.6g大瓶裝的RV培養(yǎng)基（9716）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至36℃的無(wú)菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解,在使用前保持在42℃
5將REVIVE培養(yǎng)袋子從36℃的溫箱取出放到合適的架子或支撐物上
6向樣品袋內(nèi)（共200ml）加入200ml預(yù)熱到42℃的預(yù)先制備的選擇性RV培養(yǎng)基，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用一邊到另一邊的方式輕輕混勻
7松散地扎上袋子口，并將其放到架子或支持物上，42oC培養(yǎng)16-24小時(shí)
8加入10ml 36℃的無(wú)菌水到1瓶M肉湯培養(yǎng)基（9722）中，握緊搖動(dòng)來(lái)溶解該培養(yǎng)基
9移取1ml REVIVE/RV的培養(yǎng)液到溶解的M-肉湯內(nèi)
10 36oC培養(yǎng)下6小時(shí)
檢測(cè)條檢測(cè)過(guò)程
1. 從培養(yǎng)箱中取出樣品袋，混勻，取200ul或者8滴到樣品杯中
2. 從裝檢測(cè)條的瓶中取出沙門氏菌檢測(cè)條
3. 將檢測(cè)條按箭頭向下端浸入到有樣品的樣品杯中，放置15分鐘
4 . 15分鐘后讀取結(jié)果
- 結(jié)果的解釋
外觀表現(xiàn)
15分鐘內(nèi)在質(zhì)控區(qū)和檢測(cè)區(qū)都出現(xiàn)顯色線，結(jié)果為陽(yáng)性；
15分鐘時(shí)只有質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)顯色線，結(jié)果為陰性；
如果質(zhì)控區(qū)沒(méi)有顯色線，則檢測(cè)無(wú)效，需要用另一個(gè)檢測(cè)條檢測(cè)；
超過(guò)20分鐘讀取結(jié)果是不正確的；
可選擇的電子解釋
根據(jù)Reveal AccuScan儀器說(shuō)明書的操作，將檢測(cè)條放到該儀器上，觀察屏幕提示讀取并記錄結(jié)果
說(shuō)明： 如果沙門氏菌存在，檢測(cè)條上的檢測(cè)區(qū)會(huì)形成一條明顯的線，線深淺的程度與沙門氏菌的血清變型或含量有關(guān)，如果出現(xiàn)明顯可見的線條，不管深淺如何，樣品都將視為陽(yáng)性。
從RV培養(yǎng)基中遷移出來(lái)任何藍(lán)色到檢測(cè)條中都不影響結(jié)果。
- 確認(rèn)
建議用Reveal富集培養(yǎng)初步鑒定為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該采用BAM或者BLG中的涂布平板法確認(rèn)。
說(shuō)明： 用BAM或MLG方法檢測(cè)一個(gè)“復(fù)制”的“亞樣品”的結(jié)果并不一定與Reveal檢測(cè)的結(jié)果一致！細(xì)菌并不是均勻的分布于樣品中（對(duì)于固體或干的樣品更是如此），因此，復(fù)制的亞樣品可能不含有沙門氏菌。
用品的處理
按照當(dāng)?shù)刂莼蚵?lián)邦政府實(shí)施的所有相關(guān)規(guī)定處理（高壓滅菌或漂白粉漂白等方法處理）Reveal檢測(cè)裝置，移液管，培養(yǎng)基等。