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島津應(yīng)用:微芯片電泳檢測(cè)中華鱉蛋白粉中提取的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物
中華鱉是高蛋白食品,具有滋補(bǔ)身體增強(qiáng)免疫力的功效,然而直接食用中華鱉,其營(yíng)養(yǎng)吸收率并不高。相比之下,中華鱉蛋白粉更容易被人體吸收,是具有高附加值的營(yíng)養(yǎng)食品。然而由于中華鱉原料價(jià)格昂貴,不法分子容易對(duì)其摻假、造假以牟取非法利益。
分子標(biāo)記(molecular marker)是一種新的遺傳標(biāo)記方法,它是以 DNA 多態(tài)性與性狀間的緊密連鎖關(guān)系為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記。DNA 分子標(biāo)記是由于缺失、插入、易位、倒位、重排或由于存在長(zhǎng)短與排列不一的重復(fù)序列等機(jī)制而產(chǎn)生的多態(tài)性,其本質(zhì)上是指能反映生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異特征的DNA 的片段,因此,可以實(shí)現(xiàn)物種鑒定的目的。這種 DNA 的片段是基因組 DNA 經(jīng)限制性內(nèi)切酶切割,或作分子雜交后在電泳膠上或檢測(cè)得到的。由于基因組一般很大,無法進(jìn)行全面的序列分析,需要針對(duì)基因組中個(gè)別特征基因片段進(jìn)行研究,選擇合適的分子標(biāo)記片段是一個(gè)關(guān)鍵問題。目前的研究對(duì)象以線粒體DNA 的細(xì)胞色素 b 基因(Cyt b)和核糖體DNA(rDNA)為主。線粒體 Cytb 基因具有 相對(duì)高的種間差異、較低的種內(nèi)變異以及相當(dāng)長(zhǎng)的變化序列,因而可通過 Cyt b 鑒別密切相關(guān)的物種。
分子標(biāo)記技術(shù)為中華鱉蛋白粉鑒定提供了新的檢測(cè)手段,這就需要從蛋白粉中提取合適的DNA 用于分子標(biāo)記。然而中華鱉蛋白粉加工工藝精細(xì),所提得的 DNA 結(jié)構(gòu)是否被破壞,zui終能否用于 PCR 擴(kuò)增,即 DNA 分子標(biāo)記鑒定是否適用中華鱉蛋白粉,是一個(gè)需要探討的課題。為此本文利用改動(dòng)的試劑盒方法對(duì)市售中華鱉蛋白粉進(jìn)行 DNA 提取,并用通用線粒體細(xì)胞色素 b 基因(Cyt b)引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增,微芯片電泳 MultiNA 檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。結(jié)果表明蛋白粉中可以提取到線粒體細(xì)胞色素 b 基因(Cyt b),與從中華鱉肌肉樣品中得到的陽性對(duì)照樣品結(jié)果相似,即約 450 bp 的產(chǎn)物。本方法為分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于高附加值產(chǎn)品的鑒定提供了技術(shù)基礎(chǔ)。
微芯片電泳MultiNA
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