您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)
會(huì)員.png)
6
MaxCyte電轉(zhuǎn)：開(kāi)啟角化細(xì)胞工程化之門(mén)，重塑皮膚治療未來(lái)
內(nèi)容摘要
(1) 角化細(xì)胞 (Keratinocytes) 在治療多種皮膚、口腔和耳部疾病方面具有潛力。
(2) 成年角化細(xì)胞的體外培養(yǎng)和擴(kuò)增容易，適合自體和同種異體細(xì)胞治療產(chǎn)品。
(3) 之前限制：成年角化細(xì)胞缺乏高效的轉(zhuǎn)染方法。
(4) 本研究目標(biāo)：開(kāi)發(fā)符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的、可擴(kuò)展的細(xì)胞工程流程，使用MaxCyte®電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)染來(lái)自四個(gè)不同解剖位置的新生兒和成年原代角化細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)流程
• 從全皮樣、鼓膜、扁桃體、前臂等部位提取純凈的原代角化細(xì)胞。
• 胞培養(yǎng)、擴(kuò)增、冷凍保存、基因工程、驗(yàn)證，最終形成細(xì)胞治療產(chǎn)品。
主要發(fā)現(xiàn)
• 使用MaxCyte技術(shù)，高效地將mRNA或CRISPR-Cas9核糖核蛋白 (RNPs) 傳遞給原代角化細(xì)胞，不損害細(xì)胞活性、形態(tài)或生長(zhǎng)能力。
上圖：使用MaxCyte ATx電轉(zhuǎn)儀對(duì)原代包皮角化細(xì)胞進(jìn)行mRNA-GFP或ATTO550標(biāo)記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果，顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率。
上圖：使用CCR5靶向CRISPR RNP電穿孔后的原代角化細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)，電轉(zhuǎn)后細(xì)胞增殖幾乎不受影響。
上圖：使用MaxCyte ATx儀器對(duì)來(lái)自不同解剖位置的原代皮膚成纖維細(xì)胞、扁桃體來(lái)源的口腔角化細(xì)胞和鼓膜 (中耳) 角化細(xì)胞進(jìn)行ATTO 550標(biāo)記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果，顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率。
• 單次電穿孔可實(shí)現(xiàn)高效的多重基因編輯，簡(jiǎn)化了流程。
上圖：分別電穿孔1種、2種、6種CRISPR RNPs后96小時(shí)，使用Synthego®多向?qū)Щ蚯贸噭┖羞M(jìn)行的流式細(xì)胞儀分析。
• 提高了轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活性，減少了角化細(xì)胞工程時(shí)間，提高了成功率。
• 展示了MaxCyte電穿孔過(guò)程的可擴(kuò)展性，可工程化數(shù)百萬(wàn)原代角化細(xì)胞，不損失效果。
MaxCyte電穿孔技術(shù)使原代角化細(xì)胞基因組工程更快，風(fēng)險(xiǎn)更低。
全文結(jié)論
(1) MaxCyte ATx®平臺(tái)提供了一種高效、符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的多重轉(zhuǎn)染方法，用于開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)工程化角化細(xì)胞治療產(chǎn)品。
(2) 電穿孔技術(shù)保持了原代新生兒和成年角化細(xì)胞的高活性、正常形態(tài)和低氧化應(yīng)激。
(3) 該技術(shù)允許多達(dá)6個(gè)CRISPR RNPs的傳遞，經(jīng)過(guò)多輪轉(zhuǎn)染，效率不降低。
(4) 平臺(tái)的靈活性允許快速開(kāi)發(fā)特定亞群的角化細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的自體和同種異體細(xì)胞治療流程。
(* 本文轉(zhuǎn)載自「拓普百奧」微信公眾號(hào)，作者：宇文數(shù)學(xué)，已獲得作者授權(quán))
▍關(guān)于上海昊擴(kuò)：
上海昊擴(kuò)科學(xué)器材有限公司成立于2019年，總部位于上海，是一家實(shí)驗(yàn)室設(shè)備/耗材及分析儀器的專(zhuān)業(yè)服務(wù)商。公司致力于為生物、醫(yī)藥、物性檢測(cè)、化工分析、食品、工業(yè)生產(chǎn)等相關(guān)領(lǐng)域客戶(hù)提供國(guó)內(nèi)外高科技專(zhuān)業(yè)設(shè)備以及技術(shù)咨詢(xún)服務(wù)。