您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
6
Pala, 助力單B細胞分離及聯(lián)合測序
單細胞RNA測序（scRNA-seq）作為一種高通量測序技術(shù)，它允許研究者在單個細胞水平上測量基因表達，揭示細胞群體內(nèi)部的異質(zhì)性，識別不同細胞類型或狀態(tài)的基因表達模式，為細胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、疾病研究和藥物發(fā)現(xiàn)等領(lǐng)域的研究提供了新的維度和深度。
單細胞RNA測序技術(shù)起始于單細胞分離，Bio-Techne單細胞柔性系統(tǒng)Pala為單細胞分選提供了快速便捷的途徑。以下實驗通過單細胞柔性分選系統(tǒng)Pala分選經(jīng)細胞活性染料及特異性熒光抗體標(biāo)記的單個活化B細胞。通過對靜息及活化B細胞基因表達分析研究活化對基因表達的影響。
實驗步驟
（1）利用mCD40L-3T3飼養(yǎng)細胞對人原代記憶B細胞活化6天。收集活化后細胞并用抗人CD27-PE抗體及細胞活性染料CellTrackerGreen進行染色。
（2）在板中加入每孔4微升裂解液，利用單細胞柔性分選系統(tǒng)Pala將PE及FITC陽性細胞分選至96孔PCR板中。細胞裂解后進行cDNA合成及RNA建庫測序。
（3）每孔中進行VH及VL抗體可變區(qū)基因特異性擴增（qPCR）。
（4）基因文庫利用Illumina Nextseq進行測序，比較活化及靜息狀態(tài)下B細胞的基因表達差異。
實驗結(jié)果
（1）單細胞分離效率：經(jīng)過擴增后，96孔中有93孔含有cDNA（97%）。
（2）單細胞驗證：Sanger測序表明所有的孔中都是單個細胞，不存在二聚體的情況。
（3）免疫球蛋白基因表達：免疫球蛋白qPCR結(jié)果顯示所有所有樣品中均表達重鏈IGVH，輕鏈僅表達kappa或lambda（IGVK、IGVL）中的一種。
（4）B細胞活化相關(guān)基因表達變化：觀察到多個與B細胞活化相關(guān)的基因表達發(fā)生變化。這些基因包括但不限于CD22、CD19、BLNK、PLCγ2、IRF4、BLIMP1、XBP1、CD27、CD38和CD319。
（5）免疫球蛋白亞型表達：展示了IgG、IgA以及kappa和lambda輕鏈的表達情況，這有助于了解B細胞在活化狀態(tài)下的免疫球蛋白亞型轉(zhuǎn)換。
Bio-Techne單細胞柔性分選系統(tǒng)Pala為單細胞分離和分選提供了一個輕柔、快速、易于操作平臺，可與下游的單細胞基因組分析聯(lián)合使用。
* 本文轉(zhuǎn)載自「ProteinSimple」微信公眾號
> >關(guān)于ProteinSimple：
美國納斯達克上市公司Bio-techne (Nasdaq: TECH) 集團旗下的蛋白質(zhì)分析品牌，一直致力于研發(fā)和生產(chǎn)更精準(zhǔn)、更快速、更靈敏的創(chuàng)新性蛋白質(zhì)分析工具，包括蛋白質(zhì)電荷表征、蛋白質(zhì)純度分析、蛋白質(zhì)翻譯后修飾定量檢測、蛋白質(zhì)免疫實驗如 Western 和 ELISA 定量檢測蛋白質(zhì)表達等技術(shù)，幫助生物制藥、細胞治療、生物醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)等領(lǐng)域科學(xué)家解決蛋白質(zhì)分析問題，深度解析蛋白質(zhì)和疾病相互關(guān)系。
>> 關(guān)于上海昊擴：
上海昊擴科學(xué)器材有限公司成立于2019年，總部位于上海，是一家實驗室設(shè)備/耗材及分析儀器的專業(yè)服務(wù)商。公司致力于為生物、醫(yī)藥、物性檢測、化工分析、食品、工業(yè)生產(chǎn)等相關(guān)領(lǐng)域客戶提供國內(nèi)外高科技專業(yè)設(shè)備以及技術(shù)咨詢服務(wù)。2024年，上海昊擴正式與美國Bio-techne集團旗下的蛋白質(zhì)分析品牌ProteinSimple達成合作，成為其華東大區(qū)授權(quán)代理商。
